凡纳滨对虾Arf6基因克隆及表达分析.pdfVIP

第 32卷 第 2期 渔 业 科 学 进 展 Vo1．32。NO．2 2 0 1 l 年 4月 PRoGRESS IN FISHERY SCIENCES Apr．，201l 凡纳滨对虾Arf6基 因的克隆及表达分析 崔 亮h。 殷 勤。 陈晓汉 彭金霞 王志伟。 李 奎。 (广西大学 ，南宁 530021) (广两壮族 自治 区水产研究所 ，南宁 530021) (。中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 ，北京 100193) 摘 要 通过 电子克隆所得序列设计 引物 ，采用 PCR扩增方法首次克隆得到长 695bp的凡纳滨对 虾 Ar厂6基 因序列 ，其 中包括 96bp的5 非翻译 区(Untranslatedregion，UTR)、71bp的3 非翻译 区 和 528bp的开放阅读框 。编码 175个氨基酸残基，推算分子量约为 20kDa，理论等 电点为 8．82，分子 式为C。。H 。N O S。氨基酸序列分析表明，Arf6基 因编码的氨基酸序列中具有保守的GTP结 合 区域，总的带负电荷的残基 (Asp+Glu)为 21，总的带正 电荷的残基 (Arg+Lys)为 25。与其他物种 的Ar厂6基因进行 同源 比对发现 ，该基 因的氨基酸序列具有较 高的保守性，基于氨基酸序列的聚类分 析表 明，凡纳滨对虾与果蝇属种类亲缘关系最近 。半定量 RT—PCR的结果显示，该基 因在组织 中广 泛表达且在肝胰腺 中表达量最高，在 眼柄 中表达最低 ；其在 经桃拉综合征病毒 (TSV)感染后的凡纳 滨对虾肝胰腺 中的表达量显著高于在无特定病原 (SPF)凡纳滨对虾；加之 ProtFun在线预测蛋 白质 的功能分类，表明Ar厂6基因可能是一免疫应答因子参与凡纳滨对虾免疫防御反应。 关键词 凡纳滨对虾 RT—PCR 基 因克隆 Arf6 中图分类号 Q785，Q786 文献识别码 A 文章编号 1000—7075(2011)02—0060—07 MolecularcloningandexpressionanalysisofArf6inLitopenaeusvannamei CUIIiang，。 YIN Qin。 CHEN Xiao—han PENGJin～xia WANG Zhi—wei。 IIKui。 (GuangxiUniversity，Nanning530021) (GuangxiInstituteofFisheries，Nanning 530021) (。InstituteofAnimalScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193) ABSTRACT Aecordingtothesequencefrom theelectroniccloning，apairofprimerswere designedtoclonetheArC6geneinLitopenaeusvannarneibyPCR．A 695bpcDNA wasob— tained。which contained a96bp 5 untranslatedregion (UTR)，a528bp open readingframe (ORF)，and a71bp 3 UTR．Theencoded protein wascomposed of175am ino acids，with a molecularweightof20kDaandthecalculatedisoelectricpointof8．82．Themolecularformula waspredictedtobeC896H】426