硫酸化酵母葡聚糖体外和体内对大肠杆菌抑制作用比较.docVIP

硫酸化酵母葡聚糖体外和体内对大肠杆菌抑制作用的比较 摘 要： 以酵母碱不溶性葡聚糖为原料，硫酸为酯化剂，在尿素-二甲基亚砜溶液中进行硫酸酯化反应得到易溶于水的白色硫酸化葡聚糖。利用得到的硫酸化葡聚糖进行体外和体内抑制大肠杆菌效果研究。体外抑菌实验结果表明：硫酸化葡聚糖在体外对大肠杆菌的生长没有抑制作用。小鼠活体实验显示：硫酸化葡聚糖能显著提高大肠杆菌致腹膜炎的小鼠的成活率。关键词： 酵母葡聚糖； 硫酸化； 硫酸化葡聚糖； 抑菌； 大肠杆菌 Comparison of the Inhibition Effects of Sulfated Glucan on E.coli in Vitro in Vivo Abstract: Alkali-insoluble β -glucan was used as raw materials to produce water-soluble white sulfated glucan by sulfuric esterification in urea-DMSO solution with sulfuric acid as esterifying agent. Then the inhibition effects of the produced sulfated glucan on E.coli in vitro and in vivo were studied. Its bacteriostasis in vitro showed that it could not inhibit the growth of E.coli in vitro. In vivo experiments in mice suggested that sulfated glucan could significantly enhance the survival rate of mice with peritonitis induced by E.coli. Key words: β-glucan; sulfated; sulfated dextran; bacteriostasis; E.coli 酵母碱不溶性葡聚糖是一种以 β-1，3 为主链并伴 以间或的 β-1，6 侧链的天然高分子聚合物，具有多种免 疫刺激活性， 能够通过刺激免疫系统对生物反应进行修 饰，保护机体免受异物的感染，增强机体的免疫能力，抑 制肿瘤，抗氧化和促进伤口愈合等作用 [1-3] ，是一种重要 的生物效应应答剂（biological response modifiers, BRM）。 但由于酵母碱不溶性葡聚糖难溶于水， 其应用受到了很 大限制。因此增加其水溶性是一个急需解决的问题，增溶 的主要方法有酸解、酶解、超声波、热变性和化学修饰。其 中化学修饰法是比较常用的一种方法， 而硫酸化是葡聚 糖化学修饰的一个重点。 修饰后的硫酸化葡聚糖同样具 有免疫增强活性，且其水溶性明显优于葡聚糖，能够扩展 葡聚糖作为免疫活性增强剂的应用范围， 开发前景十分 广阔。 本文以酵母碱不溶性葡聚糖为原料，硫酸为酯化剂， 在尿素-二甲基亚砜溶液中进行硫酸酯化反应得到易溶 于水的白色硫酸化葡聚糖。 并对其在体外和体内对大肠 杆菌的抑制作用进行了研究和比较。 1 材料与方法 1.1 碱不溶性酵母葡聚糖制备 [4] 称取干燥的酵母细胞壁粗提物 100 g，加入 3 %的氢 氧化钠溶液 600 mL，搅拌均匀，将混合物置于 75 ℃水浴 中加热 3 h，冷却至室温，4000 r/min 离心 10 min，沉淀物 水洗两遍。 水洗过的沉淀物， 加入 3 %的氢氧化钠溶液 400 mL，混合均匀后置于 100 ℃条件下处理 2 h，冷却至 室温，4000 r/min 离心 10 min，重复水洗 2 次。 沉淀用丙 酮处理，4000 r/min 离心 10 min， 重复用丙酮洗涤 2 次， 置于 40 ℃干燥，得到酵母不溶性葡聚糖。 1.2 供试菌种和动物 大肠杆菌（E.Coli）,由天津科技大学菌种保藏中心提 供。ICR/HSD 小鼠，约重 18 g ，购自中国人民解放军军事 酿酒科技 2010 年第 3 期（总第 189 期）·LIQUOR－MAKING SCIENCE ＆ TECHNOLOGY 2010 No．3(Tol．189) 37酿酒科技 2010 年第 3 期（总第 189 期）·LIQUOR－MAKING SCIENCE ＆ TECHNOLOGY 2010 No．3(Tol．189) 医学院实验动物中心。 酵母细胞壁粗提物，由安琪酵母股份有限公司提供。 1.3 培养基 细菌培养基：牛肉膏 5 g、蛋白胨 10 g、NaCl l5 g、琼 脂 20 g