离子交换色谱测定乳制品中三聚氰胺.pptxVIP

离子交换色谱- 紫外检测法测定乳制品中三聚氰胺作者：何强, 孔祥虹, 李建华, 乐爱山, 赵洁汇报人：马冬磊 段勤勇一、引言最近美国要求出口到美国的含蛋白产品必须检测三聚氰胺。三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料, 具有一定的肾毒性。其分子中含有大量氮元素, 而用全氮法检测蛋白质含量时不能够区分这种“伪蛋白氮”, 所以一些不法厂家, 往产品中添加三聚氰胺粉以提高蛋白质含量。本研究建立了测定乳制品中三聚氰胺的离子交换色谱法, 该方法简便、快速, 实用性强, 回收率良好, 检测结果稳定可靠。二、实验1、仪器和试剂Agilent 1200型高效液相色谱系统:配四元泵、DAD检测器、自动进样器及色谱数据处理工作站( 美国Agilent公司）SUPELCOSILTM LC - SCX离子交换色谱柱( 25 cm ×4.6 mm, 5 μm)磷酸、磷酸二氢钾( 分析纯) ; 水为超纯水( PURELAB PULS超纯水器制备)三聚氰胺标准品( 纯度99.5 %) 2、色谱条件流动相: 浓度为0.05 mol / L磷酸二氢钾溶液( 磷酸调pH值至3.0) - 乙腈( 70∶30) ; 流速: 1.0 mL/min;色谱柱温度：30 ℃; 检测器: 二极管阵列检测器; 检测波长为240 nm; 进样量：10 μL。 应用上述条件, 取1.0 mg/ L的三聚氰胺标准品溶液进样, 色谱图如图1所示。3、样品前处理1）样品制备：纯牛奶、酸牛奶等液体样品: 直接称取混合均匀的样品5.0 g( 精确至0.01 g) 。酸乳、果乳等较稠的样品: 称取混合均匀的样品5.0 g( 精确至0.01 g) , 加入5 mL水, 涡旋混匀。奶粉等固体样品: 称取充分混匀的样品5.0 g( 精确至0.01 g) , 加入10 mL水, 涡旋混匀.2）提取：向 1）制备好的样品中加入35 mL乙腈, 振摇提取5 min , 用水定容至50.00 mL, 4000 r / min 离心5 min, 上清液过0.45 μm的滤膜, 进样检测。纯牛奶、酸牛奶、酸乳、果乳、奶粉等5种乳制品的HPLC 色谱图如图2( a) 所示, 添加三聚氰胺均为10.0 mg/ kg时的HPLC色谱图如图2(b)所示。三、结果与讨论1、线性范围、检出限及回收率配制三聚氰胺质量浓度为0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0,20.0, 50.0, 100.0 mg/ L 的系列标准品溶液, 按照色谱条件进样检测,进行线性回归, 得标准曲线回归方程为Y = 40.152 X -5.2576( r = 0.9999) 。将标准品溶液稀释进样, 以信噪比为10( S / N =10) 计算, 三聚氰胺的最低检出质量浓度为0.1 mg/ L, 按1.3中样品处理方法, 乳制品中三聚氰胺最低检出限为1.0 mg/ kg。对15 份纯牛奶样品进行加标回收试验, 分2.0, 10.0, 50.0 mg/ kg三个加标水平, 结果如表1所示。由表1可以看出, 回收率均在93.8 % ~102.5 %之间,RSD小于3.5 %, 重现性良好。2、样品检测利用本文建立的方法对购自乳制品零售市场的5类共10种乳制品进行了检测, 该方法对这些样品均具有良好的适用性, 色谱无干扰, 回收率均大于96.3 %, 检测结果如表2所示, 在所检样品中三聚氰胺均未检出。3、讨论1）色谱条件的选择：离子浓度、pH值及乙腈比例三聚氰胺对流动相中磷酸二氢钾溶液浓度变化比较敏感 流动相的pH值对三聚氰胺的出峰时间和分离效果影响明显,pH值为3.0时, 色谱保留时间和分离度均较为理想( 图2)三聚氰胺对流动相中乙腈比例变化不敏感, 使三聚氰胺与干扰峰有效分离, 30 %时分离良好。2）提取条件的选择乙腈的沉淀蛋白的效果良好, 三聚氰胺的回收率在93 %以上, 提取液与流动相的组成基本相同, 有利于保护色谱系统, 所以选用乙腈作为提取溶剂。提取时, 样品先用水充分分散、混匀, 然后再沉淀蛋白, 可以提高三聚氰胺的回收率, 但在蛋白质沉淀前样品中的水最好不要超过15 mL, 否则沉淀蛋白的效果不佳。四、结论本研究首次建立了乳制品中三聚氰胺的检测方法, 该方法简便、快捷、稳定、可靠, 对乳制品中的三聚氰胺检测具有广泛的适用性, 对于鉴别乳制品中的“伪蛋白”, 监控“以次充优”现象, 控制乳制品的质量安全, 保障人们的饮食安全具有积极的社会意义。五、建议谢 谢 ！