卵巢上皮性癌相关抗原筛选和血清学检测.pdfVIP

· 834 · 2007年 l2月第42卷第 l2期 ChinJObstetGvneco1．December20o7．Vo1．42．No．12 ． 临床 研 究 ． 卵巢上皮性癌相关抗原的筛选和 血清学检测 阳志军 杨光 蒋燕明 冉宇靓 杨治华 张玮 张洁清 潘忠勉 李力 【摘要】 目的 构建卵巢上皮性癌(卵巢癌)腹水肿瘤细胞的cDNA文库，从中筛选能用于卵巢 癌早期诊断和免疫治疗靶点的卵巢癌相关抗原。方法 用3例卵巢浆液性囊腺癌、1例卵巢黏液性 囊腺癌、1例卵巢子宫内膜样癌患者的腹水肿瘤细胞构建 cDNA文库，采用改良的重组克隆表达抗原 的血清学鉴定(SEREX)技术与抑制性消减杂交 (SSH)方法相结合 的策略从文库中筛选卵巢癌相关 抗原基因，并对其进行酶切鉴定、核苷酸测序分析。采用重组肿瘤抗原的微型血清学检测(SMARTA) 法检测筛选出的卵巢癌相关抗原与96例卵巢癌患者和96例正常妇女的血清中相应 自身抗体的阳性 反应情况。结果 经两轮血清学筛选和核苷酸测序分析，最终得到55个候选的卵巢癌相关抗原基因 片段 ，代表45个基因，分为6类 ：(1)与已知的卵巢癌相关基因同源的基因，如BARD1基因等；(2)与 其他肿瘤相关基因同源的基因，如TM4SF1基因等；(3)在一些特殊组织中表达的基因，如ILF3、FXR1 基因等；(4)与一些特殊功能蛋白基因同源的基因，如TIZ、C1D基因等；(5)与胚胎来源的基因同源的 基因，如PKHD1基因等；(6)其余为在基因库 GenBank中无同源序列可比对的未知基 因，如OV一189 基因等。TM4SF1、C1D、BARD1、FXR1、OV一189基因的噬菌体重组融合抗原与卵巢癌患者血清中相应 IgG型自身抗体反应的阳性率分别为28％、21％、23％、23％、31％，与正常妇女血清反应的阳性率分 别为9％、6％、5％、8％、13％，分别比较，差异均有统计学意义 (P0．01)；TIZ、FXR1、OV一189基因的 重组抗原与卵巢癌患者血清中相应IgM型自身抗体反应的阳性率分别为26％、28％、18％，与正常妇 女血清反应的阳性率分别为8％、11％、7％，分别比较 ，差异均有统计学意义 (P0．05)。FXR1、OV一 189基因的重组抗原与I～Ⅱ期卵巢癌患者血清中相应IgG型 自身抗体反应的阳性率(分别为34％、 46％)高于Ⅲ～Ⅳ期者(分别为 16％、23％)，两者分别比较，差异均有统计学意义(P值分别为0．045、 0．021)；OV．189基因的重组抗原与高分化卵巢癌患者血清中相应 IgG型 自身抗体反应的阳性率(为 67％)高于中～低分化者(为26％)，两者比较，差异均有统计学意义(P=0．001)。TIZ、FXR1基因的 重组抗原与I～Ⅱ期卵巢癌患者血清中相应IgM型自身抗体反应的阳性率(分别为40％、46％)高于 Ⅲ～Ⅳ期者(分别为 18％、18％)，两者分别 比较，差异均有统计学意义 (P值分别为0．018、0．004)。 当联合分析TM4SF1、C1D、TIZ、FXR1基因的重组抗原的相应 IgG型自身抗体及TIZ、FXR1基因的重 组抗原的相应IgM型自身抗体 (即自身抗体谱)时，诊断卵巢癌的敏感度为66％，准确度为73％；将该 自身抗体谱与cA 联合时，敏感度、准确度均有明显提高，分别为83％、80％。结论 SEREX技术与 SSH方法相结合筛选肿瘤抗原基因是一种行之有效的、能筛选出具有较高特异性肿瘤抗原基因的研 究策略；TM4SF1、C1D、TIZ、BARD1、FXR1、OV一189基因的重组抗原在血清 中的相应 自身抗体可作为 卵巢癌诊断的标志物，多个抗原的联合检测可提高诊断效率。 【关键词】 卵巢肿瘤；cA一125抗原；双杂交系统技术；基因文库； 血清学试验 ScreeningandFflero-irnmunosereeningofovarina epithelialcancerassociativena tigens YANGZhi— jun ，YANGGuang，JIANGYah—ming，RANYu-liang，YANGZhi—hua，ZHANGWei，ZHANGJieq‘ing， Ⅳ Zhong．mictn．LI“ DepartmentofGynecologicalOncology，TumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity， Nanning53