苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点及其效应机理.pdfVIP

苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点 及其效应机理1 李庆章，郝艳红，高学军，刘永杰，高文学，赵冰 东北农业大学生命科学学院（150030） E-mail: qzli@ 摘 要：应用酶活性和代谢物含量测定技术，对用药后猪带绦虫囊尾蚴能量代谢途径及其关 键酶活性进行研究，确定苯并咪唑氨基甲酸酯类抗囊药物对猪带绦虫囊尾蚴的作用靶点为延 胡索酸还原酶 （FR）复合体，效应机理为抑制葡萄糖的摄取，非竞争性抑制延胡索酸还原酶 （FR）复合体活性，导致虫体能量代谢紊乱、能量耗竭，以至死亡。 关键词：猪带绦虫囊尾蚴，作用靶点，效应机理，能量代谢 1. 引 言 最新研究结果表明，猪带绦虫六钩蚴 （以下简称猪六钩蚴）主要以氨基酸代谢提供能量， 而糖类物质代谢相对较弱。猪带绦虫囊尾蚴 （以下简称猪囊尾蚴）具有糖有氧分解、糖无氧 分解、局部逆向三羧酸循环、三羧酸循环、脂类分解、氨基酸分解、嘌呤分解等能量代谢途 径，由未成熟期到成熟期，能量代谢逐渐活跃，而且未成熟期和成熟期猪囊尾蚴物质代谢和 [1] 能量代谢存在显著差异 。 迄今，尚未发现对发育各个时期的猪囊尾蚴均为有效、安全和疗程短的防治药物，也没 找到在各个水平上都能够预防猪囊尾蚴病 （或称猪囊虫病）的有效疫苗[2,3] 。这些问题的存 在，缘于较深层次的基础理论研究不足。事实证明，由于猪囊尾蚴的生长发育特点，药物治 疗仍然是一个无法回避且十分重要的选择。因此，在深入进行猪囊尾蚴发育生物学研究的基 础上，进一步研究猪囊尾蚴药效生物学，研究抗囊药物的作用靶点和抗囊效应机理，具有重 要的学术理论意义和临床实际意义。 2. 材料与方法 2.1 实验材料 2.1.1 猪六钩蚴 由黑龙江省驱绦灭囊办公室、哈尔滨医科大学寄生虫教研室和吉林农业大学囊虫病研究 所提供。 2.1.2 猪囊尾蚴 由东北农业大学动物医学学院基础兽医学系“猪带绦虫囊尾蚴生长发育的能量代谢规律 研究”项目组，人工成功感染 49 头长白与哈白杂交家猪后分期获得。 1基金项目：国家自然科学基金资助项目（No ﹡通讯作者：Tel: 0451 E-mail: qingzhangli@ 。 - 1 - 2.1.3 实验药物 由中国农业科学院上海寄生虫病研究所猪带绦虫囊尾蚴病研究室提供。经体外筛选后， 确定阿苯达唑（NX ）和奥芬达唑（NX ）进入体外和体内实验研究阶段。 0 1 2.2 实验方法 2.3.1 猪六钩蚴的体外培养及药物作用靶点的确定与药效机理研究 确定猪六钩蚴药物作用靶点与探索药效机理[4] 。剪碎绦虫节片取出猪六钩蚴作脱壳处理 后，置于不同培养液中培养。 ① 对照组（C 组） 此组猪六钩蚴用 PRMI 1640 完全培养液，在培养箱中培养； ② 囊效 0 号组（NX0组） 此组猪六钩蚴用含 400 μg/ml 囊效 0 号的PRMI 1640 完全 培养液，在培养箱中培养； ③ 囊效 1 号组（NX1组） 此组猪六钩蚴用含 400 μg/ml 囊效 1 号的PRMI 1640 完全 培养液，在培养箱中培养； 以上各组分别在24h 、72h取一定量虫卵备测。 2.3.2 猪囊尾蚴的体外培养及药物作用靶点的确定与药效机理研究 [5] 确定未成熟期和成熟期体外培养猪囊尾蚴药物作用靶点与探索药效机理 。 （1）未成熟期猪囊尾蚴的体外培养及药物作用靶点与药效机理 将感染后 30 日患囊尾蚴病的猪屠宰，从肌肉中取出猪囊尾蚴，置于孵育液中，37ºC 孵 育至头节伸