健脾化瘀中药提高胞嘧啶脱氨酶单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗肝细胞癌实验的研究.pdfVIP

健脾化瘀中药提高胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒胸苷 激酶基因治疗肝细胞癌的实验研究1 1 2 3 4 5 5 王昌俊 ，李建军 ，陈祖兵 ，刘友章 ，邓力 ，潘竟锵 1 广东省人民医院中西医结合科，广州（510080 ） 2 中山大学附属第二医院中西医结合科，广州（510120 ） 3 武汉大学人民医院普外科，武汉（430060 ） 4 广州中医药大学第一附属医院消化科，广州（510405 ） 5 广州市中医院肿瘤科，广州（510130 ） E-mail ：gzwchj@126.com 摘 要：目的：观察健脾化瘀中药提高胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗肝细 胞癌的作用。方法：在脂质体 lipofectamine 的介导下将含有双自杀基因的腺病毒载体 pAd-CD/TK 导人293 细胞，收集其病毒上清，转染人肝癌细胞BEL7402 ，用健脾化瘀中药 960 复方含药血清取代小牛血清培养，给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-flourocytosine, 5-Fc)和更 昔若韦(ganciciovir, GCV)后，用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法测定BEL7402 细胞存活率。裸 鼠人肝癌模型转染CD/TK 双自杀基因后，给予5-Fc500 mg/kg 体重，GCV 100 mg/kg 体重腹 腔注射，q.o.d ，共10 次，同时予健脾化中药960 复方灌胃，1 次/d 。观察肿瘤生长情况。结 果：给予前体药物5 －Fc 和GCV 后，CD/TK 转染细胞被杀死。并表现出较强的旁观者效应。 转染细胞比例达到 10%即表现出较强的杀伤作用(P0.01)。健脾化瘀中药960 复方具有提高 旁观者效应作用，1.67ml/kg 和 2.5ml/kg 960 复方含药血清组细胞存活率显著低于对照组 (P0.01)。转染基因组应用5-Fc 和GCV 治疗后，裸鼠肝癌的生长明显受到抑制(P0.05) ，抑 瘤率39.42 ％，单用中药组抑瘤率 18.04 ％，中药与CD/5-Fc 和HSV-tk/GCV 联合运用组，较 单纯CD/5-Fc/HSV-tk/GCV 对裸鼠肿瘤模型的生长抑制作用更加明显(P0.05) ，抑瘤率55.10 ％。结伦：腺病毒介导CD/TK 自杀基因可有效地杀死人肝癌BEL7402 细胞，明显抑制裸鼠 人肝细胞癌生长，健脾化瘀中药960 复方具有显著提高CD/TK 双自杀基因对人肝癌细胞的 抑杀作用。 关键词：腺病毒，自杀基因，肝肿瘤，基因治疗，中医药疗法，健脾化瘀药 原发性肝癌是恶性程度极高的恶性肿瘤，其治疗一直是肿瘤研究的难点。 自杀基因治 疗已成为肿瘤研究热点[1] 。自杀基因主要有胞嘧啶脱氨酶（CD ）／5-氟胞嘧啶(5-Fc)和单纯 疱疹病毒胸苷激酶（TK ）／更昔洛韦(ganciciovir, GCV )系统。大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因 编码的胞嘧啶脱氨酶，可将胞嘧啶代谢为尿嘧啶，使对细胞无毒的 5-氟胞嘧啶(5-Fc)转化为 细胞毒性代谢产物 5-氟尿嘧啶(5-Fu)，从而发挥细胞毒作用[2] 。单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 可使无活性的药物前体更昔洛韦(ganciciovir, GCV )磷酸化，从而阻断肿瘤细胞DNA合成， [3] [4] 导致细胞死亡 。双自杀基因CD/TK 比单一的CD或TK具有更强的抗癌效应 ，但其作用仍 有待提高。增强旁观者效应是自杀基因的抗癌作用的关键。既往的研究[5-9]显示健脾化瘀中 药具有抑制人肝癌细胞增殖，促进癌细胞凋亡，逆转肝癌细胞恶性表型等作用，对大鼠肝癌 生长有抑制作用。本研究联合应用健脾化瘀中药 960 复方(JPHY)和CD/TK 自杀基因治疗肝 细胞癌，观察其体内外的抑瘤效应，研究中医药与自杀基因治疗的协同作用。 1 材料与方法 1.1 材料