mi卜34a在神经元中表达特征及功能的研究.pdfVIP

第42卷第3．4期 分子细胞生物学报 V01．42．No．3．4 2009年6月 JournalofMolecularCeU June2009 Biology mi卜34a在神经元中的表达特征及功能研究拳 戚艳婷 赵喻张 智 李 丹 顾吉轶付笑男 陈小娜 袁崇刚 赖立辉” (华东师范大学分子与化学生物学研究所，上海200062) 摘要 本研究采用Northern 年龄梯度表达的规律。同时我们发现mir-34a在大鼠前额叶原代培养神经元中的表达亦呈随培养 时程增加而递增的趋势。进一步研究表明，过表达mir-34a可能通过抑制BCL--2而引起神经元凋 亡。我们的研究结果提示mir一34a可能在神经元的发育与衰老机制中起着重要作用。 关键词： 恒河猴神经元mir-34a细胞凋亡BCL_2 microRNA(miRNA)是长度为22—25nt的单 链短序列非编码RNA。作为转录后的重要调控因 试剂(Endo—Porter Delivery 子。它参与了动植物发育、细胞增殖、细胞分化、 肿瘤发生等重要生理和病理过程[I-5]．其功能研究发夹结构前体、前体对照购自Ambion公司；Anti— 日益成为后基因组时代的热点。大量研究表明， Cruz； miRNA在脊椎动物的脑内表达非常丰富．提示这anti-PARP购自Cell Signaling 类小分子与神经系统的发生发育及其功能障碍有着 anti— ImmunoResearch：NBT／ 十分密切的联系[¨】。本研究从非人灵长类动物恒 moRse一兀TC购自Jackson 河猴入手．分析恒河猴大脑皮层神经元及大鼠原代 培养神经元中特定miRNA分子——mir一34a的表测试剂盒购自Roch。 达特性及作用．发现其随着年龄梯度递增而表达增 1．1．3仪器设备 加的规律：在过表达mir一34a的情况下，它可能通 主要有北京“六一”DYY一2C／6C型电泳仪： 过抑制BCL-2而引起神经元的凋亡。提示mir一34a 美国WEALTEC转膜仪：德国EppendorfCentrifuge 5810 可能参与神经元的发育与衰老．为揭示miRNA的 R低温超速离心机；凝胶成像仪；Eppendorf 相关可能机制研究提供一定的基础。 Mx3000 CMl850冰 pTM实时定量PCR仪：Leica 1 材料与方法 冻切片机等。 1．1材料 1．2方法 1．1．1 实验动物 1．2．1 样品采集 正常恒河猴。采自苏州实验动物研究中心。正 正常恒河猴按年龄分为新生(birth，简为B)、 常SD大鼠、孕18天SD大鼠。购自上海西普尔毕 凯实验动物有限公司。 三组．每组各三只。分割各器官组织投于液氮速 1909年分区 1．1．2试剂