对该物质进行定性和定量分析的方法。本法在药品检验中主.docVIP

4.1.1紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 4.1.2 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若该物质本身在紫外光区无吸收，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查 4.1.3 物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区（200～400nm）或可见光区（400～850nm）产生吸收。通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190～900nm 紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。郎伯-比尔（Lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为： A=log1/T=ECL 式中 A为吸光度； T为透光率 E为吸收系数 C为溶液浓度 L为光路长度 4.2 仪器 4.2.1 紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。 4.2.2 为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。 4.2.3 单色器通常由进光狭逢、出光狭逢、平行光装置、色散元件，聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200～400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非均排光谱。光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为均排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。 4.2.4 检测器有光电管和光电倍增管二种 4.2.5 紫外-可见分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。双光束分光光度计籍扇形镜交替切换光路使分成样品（S）和参比（R）两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离成两光束对应信号，信号的比值可直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。 4.3 紫外-可见分光光度计的检定 4.3.1 波长准确度 4.3.1.1 波长准确度的允差范围 紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差，紫外区为±1.0nm，500nm处±2.0nm，700nm处±4.8nm。 4.3.1.2 波长准确度检定方法 4.3.1.2.1 用低压汞灯检定 关闭仪器光源，将汞灯（笔式汞灯最方便）直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，扫描速度“慢”（如15nm/min）、响应“快”、最小狭缝宽度（如0.1nm）、量程0～100%，在200～800nm范围内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值（若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫描）。 4.3.2 吸光度准确度 精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000m l量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀释至1000ml，用配对的1cm石英池，以0.005mol/L硫酸液为空白，在235，257，313，350nm分别测定吸光度，然后换算成（E，测得值应符合下表中规定的允差范围 分光光度法允差范围 波长（nm 允差范围 235 最小 124.5 123.0~126.0 257 最大 144.0 142.8~146.2 313 最小 48.62 47.0~50.3 350 最大 106.6 105.5~108.5 4.4 样品测定操作方法 4.4.1 吸收系数测定（性状项下） 按各品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长测定其吸光度，并计算吸收系数，应符合规定范围。 4.4.2 鉴别及检查 按各品种项下的规定，测定供试品溶液的最大及最小吸收波长，有的并须测定其在最大吸收波长与最小波长处的吸光度比值，均应符合规定。 4.4.3 含量测定 4.4.3.1 对照品比较法 按各品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中所含被测成