NS-398对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡和COX-2表达影响开题报告.ppt

欢迎各位专家、教授莅临指导 ——胃肠外科1区 福建医科大学2009级硕士研究生学位课题开题报告 NS-398对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡和COX-2表达影响 所在院（系）：第一临床学院 学科（专业）：普外科学 研 究 生： 导 师： 教 授 时 间：二0一二年四月 提纲： 一.研究的背景及立题依据。 二.研究的目的及意义。 三.研究的方案及技术路线。 四.研究的可行性及创新点。 五.预实验结果 一、研究背景及立题依据 胃癌是对人类健康危害极大的常见恶性肿瘤，大部分患者就诊时已进入进展期。传统手术根治及化疗对进展期胃癌的疗效仍不理想。近年来，已有研究表明cox-2的选择性抑制剂对多种肿瘤具有抑制作用，对于胃癌cox-2抑制剂的应用理论上可以使用，但临床上还需要不断地探索 。 立题依据 1. 在肿瘤发生和发展过程中，细胞增殖和凋亡间的平衡失调是最早的生物学改变。 2.针对肿瘤细胞凋亡通路途径的治疗是目前国际上研究的热点。 3.最新研究表明cox-2的过度表达可促进癌细胞的增值、抑制癌细胞凋亡，导致癌细胞增殖和凋亡之间的失衡，也可能是胃癌发生、发展的重要因素之一。 立题依据 4.近期研究表明选择性cox-2抑制剂Ns-398可能具有活化诱导凋亡信号的caspase-3活性、抑制凋亡抑制基因Bcl-2的表达、提升介导凋亡的转化生长因子TGFβ2受体水平以及抑制抗凋亡关键激酶Akt，促进肿瘤细胞凋亡。 5.cox-2的高表达且与肿瘤的侵袭转移及血管的形成有着密切的关系。 Ns-398促进肿瘤细胞凋亡的可能机制： 立题依据 研究表明：多种癌组织中以及胃癌组织中都能检测到cox-2的高表达，而在正常生理状态下，多数组织内检测不到cox-2的表达。 理论上通过抑制cox-2的表达，即可起到抑制肿瘤发生、发展的作用。 Ns-398的作用机制 NS-398可能具有活化诱导凋亡信号的caspase-3活性、抑制凋亡抑制基因Bcl-2的表达、提升介导凋亡的转化生长因子TGFβ2受体水平以及抑制抗凋亡关键激酶Akt，促进肿瘤细胞凋亡。 抑制几种与新生血管生成和肿瘤发展有关的酪氨酸激酶受体的活性（如VEGFR 、FLT3和C-KIT），阻断肿瘤新生血管生成，间接抑制肿瘤细胞的生长。 二、研究的目的和意义 Ns-398通过抑制抗凋亡信号通路，提升介导促凋亡转化生长因子的受体水平，从而促进肿瘤细胞凋亡。 探讨Ns-398对胃癌细胞增殖、凋亡及cox-2表达的影响。 通过本课题的研究，为探讨胃癌的术后治疗提供一条新型的试验和理论思路。 三、研究方案与技术路线 1.实验分组： 取对数生长期细胞，设对照组、50μm、100μm、150μm、200μm的Ns-398药物干预组，其中对照组用不加药的正常培养液。 2.实验方法 用MTT法检测Ns-398对细胞的抑制作用。 在显微镜下对各组细胞形态学观察，并拍照。 免疫组织化学检测cox-2的表达，并用Gatalica半定量积分法进行统计学分析。 流式细胞术检测细胞凋亡情况。 5.实验流程图 材料： 1.人胃癌细胞株SGC-7901 2. Ns-398 3. MTT 4. RPMI-1640培养基 5.胎牛血清 6. 0.25%胰蛋白酶 7.兔抗人cox-2单克隆抗体 8.辣根过氧化物酶标记山羊抗兔 9. DAB显色试剂盒 10.二甲基亚砜DMSO 11. Annxin V-FITC凋亡试剂盒 四.课题的可行性及创新点 课题设计科学、合理，试验方法成熟。有望达到预期成果。 cox-2的过度表达，抑制了肿瘤细胞得凋亡，加速细胞增殖，促进了肿瘤的发生发展，这为临床寻找有效的治疗方案提供了新的思路，为cox-2抑制剂有可能用于某些肿瘤的预防和治疗提供了一定的理论依据。 五.预期的实验结果NS-398可抑制SGC-7901细胞的生长增殖，呈剂量-时间双效应 2、免疫细胞化学法显示，经Ns-398处理的SGC-7901细胞中的cox-2蛋白表达下降 cox-2免疫组化阴性对照组：以PBS代替cox-2单克隆抗体，所得结果作为阴性对照。细胞胞浆、胞核内未见黄色染色颗粒。 免疫组化阳性对照组：可见细胞胞浆、胞核内黄色染色颗粒。 200uM 药物干预组：