应用蛋白质芯片技术从电针胃经大鼠血清中快速筛选低分子量差异蛋白质.pdfVIP

应用蛋白质芯片技术从电针胃经大鼠血清中快速筛 选低分子量差异蛋白质1 1 1 1* 1 1 2 姚雯 ，杨宗保 ，严洁 ，常小荣 ，易受乡 ，叶能胜 1.湖南中医药大学针灸推拿学院，湖南长沙（430007 ） 2. 中关村生命科学园北京市蛋白组学研究中心，北京（100080 ） E-mail ：yj5381159@ 摘 要：目的 筛选正常大鼠血清与电针胃经大鼠血清中差异表达的低分子量蛋白质，为进 一步阐明针刺效应的体液机理提供理论依据。方法 采用表面增强激光解吸离子化飞行时间 质谱(SELDI-TOF-MS)技术和WCX2(弱阳离子交换芯片)对正常大鼠血清和电针胃经大鼠血 清进行蛋白质指纹图谱检测分析，通过Biomarker Wizard 和Biomarker Patterns System软件判 别分析处理数据并结合生物信息学方法筛选差异表达蛋白质。结果 与正常大鼠血清比较， 电针胃经大鼠血清蛋白质在质荷比为2000-50000有25个蛋白质峰差异有显著意义，其中有19 个标志蛋白在电针胃经大鼠血清中呈现高表达，6个标志蛋白在电针胃经大鼠血清中呈现低 表达。结论 电针胃经大鼠血清与正常大鼠血清中低分子量蛋白质存在明显差异，这种差异 蛋白质可能与电针促进胃黏膜损伤修复效应密切相关。 关键词：表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱，电针，胃黏膜损伤，血清蛋白质组 针刺疗法是祖国传统医学疗法之一，其历史可追溯到三千多年前，近年来在西方发达国 家作为一种补充替代疗法而备受人们所青睐[1,2] 。胃黏膜损伤是消化系统疾病中常见的一种 病理反应，针刺对其有很好的修复作用[3,4] ，以往研究证实电针足三里、四白等胃经腧穴可 引起胃运动及其分泌功能变化，同时血液及胃黏膜中胃泌素、P物质、胃动素、生长抑素、 表皮生长因子、转化生长因子等浓度发生改变[5,6] 。然而目前对于针刺修复效应的客观物质 基础仍未完全明了，SELDI技术是近年来新兴的蛋白质组学技术，具有优于二维电泳和其他 质谱方法的特点，可广泛用于低丰度小分子生物标志蛋白质的筛选[7-9] 。本研究通过对正常 大鼠和电针胃经大鼠血清蛋白质指纹图谱的初步观察，旨在筛选出表达差异的低分子量蛋白 质，为进一步阐明电针参与胃黏膜损伤修复的体液机制奠定理论基础。 1. 材料与方法 1.1 材料 1.试剂：乙腈、三氟乙酸、尿素、CHAPS 缓冲盐、DTT 、Tris-HC1、HPLC H O 和OPG 2 均购自Sigma 公司。 2.动物及处理：健康雄性Wistar 大鼠6 只，SPF 级，均购自湖南农业大学实验动物中心 (许可证号，体质量200～230 g，采用水浸束缚法制作胃黏膜损伤大鼠模型[10] 。按 随机数字表将大鼠随机分为正常组和电针组，每组3 只，正常组不予处理，电针组在造模后 即予电针胃经穴足三里，梁门和四白，取穴采用华兴邦动物穴位谱并结合模拟人体经穴法[11] 进行。大鼠各穴位分布：足三里：膝关节后外侧，在腓骨小头下约5mm 处；梁门：腹正中 线与乳头线之间的中线上，脐上4 寸；四白：眶下缘正中。电针刺激用G6805 型电针仪,疏 密波, 电针频率疏波4 Hz,密波20 Hz,强度以肌肉或针柄微颤为度, 电针时间30 min 。 3.蛋白质飞行时间质谱仪（ProteinChip Biology System ）：美国Ciphergen公司，PBS- Ⅱ 型。 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（NO:20050541003）和国家自然科学基金（NO 的资助。 - 1 - 4.蛋白质芯片：WCX2(弱阳离子交换芯片) ，其表面结合有