一株产脂肪酶嗜盐菌鉴定及耐盐机理初步的研究.pdfVIP

一株产脂肪酶嗜盐菌的鉴定及其耐盐机理的 初步研究1 1 1 2 1 1, 2* 赵艳辉 ，张晓梅 ，窦文芳 ，许泓瑜 ，许正宏 1．江南大学医药学院制药工程研究室，江苏无锡（214122 ） 2．江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡（214122 ） E-mail ：changlewuxian@163.com 摘 要：从采自内蒙古锡林浩特地区盐湖的样品中筛选到产脂肪酶嗜盐菌 JNPH-3 ，该菌株 可在含有9~30%NaCl 的培养基上生长，最适生长温度45 ℃，最适pH 7~9.5 。经形态学分析、 生理生化实验及16S rDNA 鉴定，JNPH-3 菌株为Halorubrum aidingense ，属于极端嗜盐菌。 + - + JNPH-3 菌株在生长过程中专一性依赖Na ，对Cl 依赖性较小，K 浓度变化对菌体生长无明 显影响。高效液相色谱分析表明，JNPH-3 菌株在液体复合培养基中能够产生四氢嘧啶，且 与环境中盐浓度呈负相关，说明JNPH-3 体内存在产生四氢嘧啶的机制来维持渗透平衡。 关键词：鉴定；Halorubrum aidingense ；脂肪酶；极端嗜盐菌；四氢嘧啶 中图分类号：Q939.97 0. 引 言 嗜盐菌是一类生长在高盐环境下的微生物。依据其嗜盐浓度的不同，可将嗜盐菌分成两 类：一类为中度嗜盐菌(最适盐浓度0.5～2.5 mol/L) ，这类嗜盐菌基本上是真细菌；另一类为 极端嗜盐菌（最适盐浓度2.5～5.2 mol/L)，这类嗜盐菌属于古细菌，生长需要至少1.5 mol/L 的NaC1 ，甚至在饱和NaC1 中(5.5 mol/L)也能生长[1] 。由于独特的生理性质，嗜盐菌在生物进 化和遗传研究方面具有较高的研究价值，其所产功能酶具有极高的盐耐受性、较高的热耐受 性和对有机溶剂的抗性[2] 。因此，嗜盐菌在工业生产中有着广泛的应用前景，也成为近几年 研究的热点。 脂肪酶是一种重要的工业用酶，广泛应用于食品、轻纺、皮革、香料、化妆品、洗涤剂、 有机合成、医药等领域[3-6] 。上世纪80年代，美国科学家发现该酶在近无水的有机溶剂中不 仅能保存其催化活力，而且还获得许多新的催化特征。而由嗜盐菌产生的脂肪酶则可能在高 盐、高pH及较高温度下具有催化活性，并且在有机溶剂中具有催化活性[7] 。尽管国内外学者 对嗜盐菌及脂肪酶都进行了多方面的研究，但对极端嗜盐菌产脂肪酶的研究却未见文献报 道。 本论文报告了采自内蒙古锡林浩特地区盐湖的样品中分离得到一株产脂肪酶的极端嗜 盐菌JNPH-3 的鉴定结果及其耐盐机理研究结果，为进一步研究该菌嗜盐脂肪酶奠定了基础。 1. 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种： 菌株从采自内蒙古锡林浩特地区盐湖的样品中分离得到，保存于江南大学制药工程研究 室。 1.1.2 主要试剂及仪器： 1 本课题得到江苏省博士后基金（S）、973 课题（2007CB707804 ）、国家“863”重点项目资助 （2006AA020104 ）及教育部新世纪优秀人才支持计划（NCET-07-0380 ）的资助。 -1- 扩增及克隆所用试剂均购自 Takara 公司，PCR 产物回收试剂盒、染色体提取试剂盒购 自上海捷瑞生物工程有限公司，PCR 仪(杭州朗基科学仪器有限公司)，1100 高效液相色谱质 谱仪(Agillent，USA),UV-2100 分光光度计(上海尤尼科仪器有限公司) 。 1.1.3 培养基及培养条件： 液体复合培养基(g/L)：NaCl 200.0 ，KCl 2.0 ，MgSO ·7H O 20.0，FeSO ·6H O 3