基因打靶技术在构建基因敲除或敲入细胞系中应用.pdfVIP

基因打靶技术在构建基因敲除或敲入细胞系中的应用 时文涛，邵荣光 （中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所，北京 100050） 摘要：同源重组介导的基因打靶技术是一项判定哺乳动物基因功能的强有力工 具。在过去的十几年中，应用于转基因小鼠的基因敲除∕敲入技术经过必要的完 善后进一步被应用于人源细胞。本文介绍了在人源细胞系中基因打靶技术应用的 优势与局限性、可应用细胞系的选择、基因打靶的基本方法，并比较系统地讲解 了重组腺相关病毒介导的基因打靶的实验设计，以使读者对这项技术的应用有一 个基本的了解。 关键词：基因打靶；基因敲除∕敲入；重组腺相关病毒 TheApplicationof GeneTargeting Technology inConstructing Gene TThheeAApppplliiccaattiioonnooff GGeenneeTTaarrggeettiinngg TTeecchhnnoollooggyy iinnCCoonnssttrruuccttiinngg GGeennee Knockout and KnockinCell Lines KKnnoocckkoouutt aanndd KKnnoocckkiinnCCeellll LLiinneess Wen-taoShi，Rong-guangShao （Institute of Medicinal Biotechnology,ChineseAcademyof Medical Sciences PekingUnion Medical College, Beijing100050,China） Abstract AAbbssttrraacctt：Homologous recombination-mediated gene targeting technology is the most powerful technique available for analysis of mammalian gene function. Over the past decade years, the methods used to generate knockout and knockin mice have been modified for use in cultured human cells. In this paper, the advantages and limitations of gene targeting technology, suitable cell lines for gene targeting and the basic method for generating knockout/knockin cell lines areintroduced. Moreover, we also systematically describe the experimental design of rAAV-mediated gene targeting toenable readers tobasically understand the application of this technology. Keywords Gene targeting Knockout Knockin rAAV KKeeyywwoorrddss：GGeennee ttaarrggeettiinngg；KKnnoocckkoouutt；KKnnoocckkiinn；rrAAAAVV 基金项目：教育部博士点基金（No: 20070023017） 1 同源重组介导的基因敲除（knockout）∕敲入（knockin）技术是一项判定基 因功能的强有力工具，这种基因打靶技术已经帮助人们在一定程度上认识了某些 细胞或动物个体异常表型的遗传基础。应用这种技术产生的模式生物（例如基因 [1] 敲除小鼠）对人类基因进行研究已经广泛开展 ，早在1