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Xfect转染试剂操作中文手册(clontech).pdf
Clontech Xfect 转染试剂操作手册
Xfect 质粒DNA转染试剂
• 操作简便且兼容血清
• 转染效率高
• 细胞毒性极低
• 细胞类型广泛
操作流程图：
Xfect 质粒DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)：
1. 转染前的准备
贴壁细胞: 在转染的前1d，接种1ml合适密度的细胞于6-孔板的单孔中，使转染当天细胞
融合度能够达到50–80% 。
悬浮细胞: 在混匀Xfect Polymer前，将细胞以5 x10e5– 1.25 x10e6/1ml接种于6-孔板中培
养。
2. 漩涡混匀Xfect Polymer 。
3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂：
Tube 1 (质粒DNA) Tube 2 (Polymer)
μl (5 μg) 质粒DNA 1.5 μl Xfect Polymer(100μg/μl)
μl Xfect 反应缓冲液 98.5 μl Xfect 反应缓冲液
100 μl 总体积 100 μl 总体积
注意:
• 上述为6-孔板单孔转染所需的量。
• 每 1μg 质粒DNA 加0.3 μl Xfect Polymer。
• 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒DNA 是最佳使用量。若您是首次使用Xfect 转染细胞，需要按照2.5 μg，
5 μg 和7.5 μg 的质粒DNA 的量进行梯度实验，确定质粒 DNA 的最优使用量。 实验证明，质粒DNA 的量
不能少于2.5 μg，不然会造成转染效率低 （经转染 Hela 细胞实验验证）。
• Xfect Polymer 预混液室温放置不要超过30min。
4. 漩涡混匀每管混合物。
5. 将Xfect Polymer预混液和DNA预混液混合，再将混合液以适中的速度漩涡10sec。
6. 室温孵育10 min，形成Xfect/DNA复合物。
7. 将200μl 纳米复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。
注意: 无需去除培养基中的血清，当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是正常的。
8. 37 ℃孵育培养板。
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Clontech Xfect 转染试剂操作手册
9. 4 hr 后，吸走培养基，向培养板中加入2ml新鲜培养基，再将培养板放回37℃培养箱
继续培养，48 hr后检测基因的表达。
Xfect 成人干细胞转染试剂
• 转染效率优于其他竞争产品
• 人间质干细胞的转染效率为67%
• 人脂肪干细胞的转染效率99%
• 对细胞分化无任何影响
成人干细胞专用Xfect 质粒DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)：
1. 转染前1d，接种2ml细胞，不同类型的细胞需要不同的接种密度，
转染时细胞应该达到的融合度：
hMSC的融合度为 50–60%
hADSC的融合度为 60–70%
2. 室温下解冻Xfect Adult Stem Cell Polymer ，漩涡混匀。
3. 对于每个孔转染实验，将以下试剂分别在2个离心管中混匀：
Tube 1 (质粒DNA) Tube 2 (Polymer)
μl (7.5 μg) 质粒DNA 3 μl Xfect ASC Polymer(50μg/μl)
μl Xfect 反应缓冲液 97 μl Xfect 反应缓冲液
100 μl 总体积 100 μl 总体积
注意:
• Xfect ASC Polymer 预混液室温放置不要超过30min。Xfect ASC Polymer 在4℃放置不超过3 个月。
•上述为6-孔板单孔转染所需的量。
4. 将各管中混合物漩涡混匀。
5. 将Xfect ASC Polymer预混液和DNA预混液以适中的速度漩涡10sec。
6. 室温孵育10 min，形成Xfect ASC/质粒DNA复合物。
7. 从步骤1的6
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