EST技术在植物基因克隆和基因表达谱的研究中应用.pdfVIP

( ) 第 21 卷第 4 期 泉州师范学院学报 自然科学 Vol. 21 　No. 4 2003 年 7 月 Journal of Quanzhou Normal University (Natural Science) J ul. 2003 EST 技术在植物基因克隆和基因表达谱研究中的应用 孙亮先 ,袁建军 (泉州师范学院 生物系 ,福建 泉州 　362000) 摘 　要 :表达序列标签是 cDNA 的部分序列 ,是通过对 cDNA 文库进行大规模一次性测序而 获得. 对于植物研究而言 ,该技术已成为一种高效、经济的克隆重要植物基因的工具. 而且 ,通过分 析来自特定组织的 EST 库可以定量地估计该组织中各类基因的表达丰度. 这种组织基因表达谱 可用于阐明植物的代谢调控网络或植物对生物、非生物胁迫反应的信号转导途径. 文章以几个典 型的实例阐释如何利用 EST 技术来克隆重要的植物经济性状基因及以此技术进行表达谱 研究. 关键词 :表达序列标签 ;植物 ;基因 ;克隆 ;表达谱 ; 电子Northern + ( ) 中图分类号:Q575 . 12 　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :1009 - 8224 2003 04 - 0063 - 05 ( ) 表达序列标签 expressed sequence tags ,EST 是 cDNA 的部分序列 ,长度一般为 300～500 bp , 由大规模cDNA 克隆一次性测序得到. 由于cDNA 的 5 ’端或3 ’端的有限序列可特异性地 [1 ] 代表一个基因 ,故被称为“表达序列标签” . EST 技术已成为发现新基因和基因表达谱研究 的有力工具 ,受到全世界许多实验室的重视. 如就水稻而言 ,至水稻基因组工作草图公布之 时 ,NCB I 的 dbEST 数据库中其 EST 已达到 104 000 条[2 ] . 本文对 EST 技术原理及其在重要 植物基因克隆和基因表达谱研究中的应用进行探讨. 1 　EST 技术的原理和方法 基因表达遵从中心法则 ,即遗传信息由 DNA 序列经转录、剪接后流向 mRNA ,再经翻译 ( ) ( 合成行使生理功能的蛋白. 典型的真核生物 mRNA 分子由 5 ’- U TR 5 ’非翻译区 ,ORF 开 ) ( ) 放阅读框架 ,3 ’- U TR 3 ’非翻译区 三部分组成 ,mRNA 在体外经逆转录而合成的 cDNA 也具有相应的结构. 对于任何一个基因 ,其 cDNA 的 5 ’- U TP 和 3 ’- U TR 都是基因特异性 的 ,所以 cDNA 的 5 ’端或3 ’端的有限序列 ,即 5 ’- EST 或 3 ’- EST 可以代表生物体某种组 织某一时期的一个表达基因. 收稿日期 :2003 - 04 - 15 ( ) 作者简介 :孙亮先 1970 - 　 ,男 ,山东胶州人 ,博士 ,现在中科院上海植物生理研究所博士后流动站从 事模式生物功能基因组研究. ( ) 基金项目 :福建省青年科技人才创新项目 2002J030 . © 1995-2004 Tsinghua Ton