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普通高中课程标准实验教科书——生物选修3[人教版]
专题1 基因工程
1.1DNA重组技术的基本工具
(一)知识与技能
简述基因工程的原理和技术
???(二)能力要求
1.通过学习DNA重组技术的基本工具,模拟制作重组DNA模型,初步掌握基因工程的基本方法提高动手能力
2.通过对书中插图、照片等的观察,学会科学的观察方法,培养观察能力。
3.通过对基本概念、基本原理、科学方法的正确理解和掌握,逐步形成比较、判断、推理、分析、综合等思维能力,具备能运用学到的生物学知识评价和解决某些实际问题的能力。
回忆基因工程相关内容
基础知识
1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
(1)来源:主要是从中分离纯化来的。
(2)种类:近种
(3)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。
(4)限制性内切酶的切割方式:①在中心轴线两侧将DNA切开,切口是黏性末端。②沿着中心轴线切开DNA,切口是平末端。
2.DNA连接酶——“分子缝合针”
种类 来源 作用 E.coliDNA连接酶 大肠杆菌 缝合黏性末端被切开的磷酸二酯键 T4DNA连接酶 T4噬菌体 缝合黏性末端和平末端 有关的DNA酶
(1)DNA水解酶:能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸,彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基
(2)DNA解旋酶:能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链,作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。注意:使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外,在适当的高温(如94℃)、重金属盐的作用下,也可使DNA解旋。
(3)DNA聚合酶:能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。
(4)DNA连接酶:是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口。注意比较DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点。
3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
(1)类:①质粒:常存在于原核细胞和酵母菌中,是一种分子质量较小的环状的裸露的DNA分子,独立于拟核之外。②病毒:常用噬菌体、动植物病毒等。
(2)运载体使用的目的:①是用它做运载工具,将目的基因转运到宿主细胞中去。②是利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。
(3)作为运载体必须具备的条件:①在宿主细胞中保存下来并大量复制 ②有多个限制性内切酶切点③具有标基因
[讲解]真正被用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
(三)课堂总结、点评 来源:主要从原核生物中分离
功能:能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,
限制性内切酶 并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷
(分子手术刀) 酸二酯键断开。
切割后的DNA末端: 黏性末端
平末端
功能:将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子
DNA连接酶 T4 DNA连接酶:既能“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,
(分子缝合针) 种类 也能“缝合”双链DNA的平末端
E·coli DNA连接酶:只能将双链片段互补的黏性末端连接
能在宿主细胞中保存下来并大量复制
条件: 有一个至多个限制酶切割点,
基因进入受体细胞的载体 有特殊的遗传标记基因,便于筛选。
(分子运输车) 质粒(常用)
种类: λ噬菌体的衍生物
动植物病毒(四)实例探究
例.下图表示限制酶切割某DNA的过程,从图中可知,该限制酶能识别的碱基序列及切点是( )
A.CTTAAG,切点在C和T之间 B.CTTAAG,切点在G和A之间
C.GAATTC,切点在G和A之间 D.CTTAAC,切点在C和T之间
【解析】 由图不难看出该限制酶识别的碱基序列是GAATTC,切点是G与A之间。
【】C
(五)巩固练习
★1.在基因工程中,科学家所用的“剪刀”、“针线”和“载体”分别是指( )
A.大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶 B.噬菌体、质粒、DNA连接酶
C.DNA限制酶、RNA连接酶、质粒 D.DNA限制酶、DNA连接酶、质粒
★2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是( )
A.能复制 B.有多个限制酶切点
C.具有标记基因 D.它是环状DNA
★★3.下列四条DNA分子,彼此间具有粘性末端的一组是( )
① ②
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