猪痢疾诊断技术研究进展.pdfVIP

著 (P0．05)。这些结果表明白细胞游走抑制琼脂糖试验可 以用于诊断 SD。 2．3 荧光抗体试验 (FAT) Ponhkon等 采用兔的高免血清制备出荧光标记抗体， 在每 l0个视野中平均检出45个猪痢疾短螺旋体，而应用普 通光学显微镜仅发现 l6个 ；检查采自猪舍内粪便时，上述指 标分别为29和 3。健康猪粪便中没有检 出猪痢疾短螺旋体。 应用该方法能在短时间内 (1．5～2h)检出和鉴定猪痢疾短 螺旋体。夏来发等 8[1也做了区分 Bh和Ti的研究，应用Ti 吸收过的兔抗 Bh血清，作 IFA来检查 Bh，发现无法与Ti 图2 实验用 鼠 明确区分。应用于田间检查，对Ti同样呈阳性反应，但比结 晶紫染色法见到的菌数明显增加。但是也不能区别Ti和Bh。 然而程国富等 9[1运用单克隆抗体6H荧光标记物 (6H—FA)、 兔抗 Bh荧光标记物 (RT—FA)、结晶紫染色法 (CVT)对 SD病猪粪 3头份、健康猪粪 1i头份进行了检测，结果表明 单抗6H直接荧光检测猪粪样品，可特异性区分开Bh和Ti， 应用单抗建立的方法简单、方便、特异性好。 2．4 微量凝集试验 (MAT) Joens和 Forsgren的研究报道 l1。以 1％胎牛 (免)血 清PBS (pH-7．2)0．05mL分别滴人微量滴定板 卜6孔， 将 10倍稀释灭活被检血清50 L加入第 l孑L，并倍比稀释 图3 实验用兔 至5孔 ，第6孔为抗原对照。每孔加抗原50 L，经振荡 后置38℃ l6～l8h，再于室混静置 i～2h然后观测结 为Ti)。结果表明Bh与Ti高免血清之间有一定的交叉反应， 果。几何平均滴度为 i：40以上即可认为该猪群感染。肖 但滴度是有显著区别的，48头 SPF猪血清的效价均在 64倍 传发等 I【略加改进了Joens的MAT方法 ，进行 了抗原稳 以下，而92头 Bh猪只中血清的抗体含量在 l28—2048倍之 定性、敏感性及特异性等试验 结果表明，该方法对揭示慢 间，其中仅有一头猪的滴度为64倍 ，因此该法可用于猪痢 性及隐性感染猪群有一定诊断价值。试验结果表明 ，一般在 疾病猪群的诊断。金梅林等 [151应用Bh免疫血清结合葡萄 感染后 15d开始出现凝集抗体，20d凝集滴度明显升高达 球菌A蛋 白 (SPA)与Hl0、2-5、X23、C17等 Bh菌株 64～ 1280倍 ，50d后开始下降，到 74d为 80倍 ，这些结 进行协同凝集试验，均出现明显凝集反应。而免疫血清结合 果与Joens报告相近。Diarr等 [121分别对微量凝集 (MA)、 不含SPA的菌株、无特定病原 (SPF)血清结合含 SPA的 问接血凝及补体结合试验等3种方法进行了比较。应用煮沸 菌株均无凝集反应。免疫血清结合SPA与 7种肠道菌均无 的Bh菌悬浮液经 l0倍稀释作为诊断抗原与采集的血清样 凝集反应。 品作微量凝集试验 ，检测未出现明显症状的猪群中痢疾带菌 2．5 酶联免疫吸附试验 (ELlSA) 猪的血清抗体，结果表明MA与其它 2种检测方法比较，操 罗满林等I161以猪痢疾短螺旋体超声裂解冻融物做抗原进 作简易而且可靠 ，是判定测试猪群是否感染猪痢疾的较好方 行酶联免疫吸附试验，测定了感染猪血清中的抗猪痢疾短螺 法。而王禹志等ll31以活性炭为载体，事先将抗原或抗体吸 旋体抗体。ELISA最适条件为 ：抗原 l0 g蛋白 ／毫升，血 附在活性炭微粒上，然后用此种带有抗原或抗体的活性炭微 清稀释度 100倍 ，酶标结合物 1000倍。对 103份感染猪血清 粒，检测相应的抗体或抗原 ，根据活性炭微粒的凝集来判定 用ELISA和平板凝集试验对比测定表明，两法呈高度正相关， 被检材料中是否有相应的抗体或抗原的存在，从而确诊疾病。 而且 ELISA多检 出8．74％的阳性样品。ELISA比平板凝集 苏雄等 “用根癌土壤杆菌酶的粗提取物加入到培养Bh的 试验更敏感，有望成为SD诊断的一种快速方法 李绪英 1171 培养基中后接种 Bh，37℃培养 5d后 ，收获并制备Bh抗 等应用SPA ELISA对采 自大同市猪场 100头份、太原市猪 原。这种抗原在MAT中能防止 自凝现象。用这种抗原检测 场 91头份和忻州市猪场 34头份血清样品进行诊断，结果表 了2头SD猪血清和6头高免兔血清 (其中用5株Bh，l株 明，SPA ELISA检