龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP合酶_亚基基因克隆及其在龙眼体胚发生过程中表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(16):3392-3401 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.16.015 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因克隆 及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析 1,2 1 1 1 1 赖呈纯 ，赖钟雄 ，方智振 ，林玉玲 ，姜顺日 1 2 （福建农林大学园艺植物生物工程研究所，福州 350002 ； 福建省农业科学院农业工程技术研究所，福州 350003 ） 摘要：【目的】克隆龙眼（ Dimocarpus longan Lour. ）胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因（mitochondrial F1-ATPase beta subunit gene），并分析该基因在龙眼体胚发生过程中的表达情况。【方法】采用RT-PCR结合RACE 法，通过T/A克隆测序，获得龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因全长序列；随后通过实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法研究该基因在龙眼体胚发生过程中的表达规律。【结果】成功克隆龙眼胚性愈伤组织线粒体 ATP 合 酶β亚基基因完整 cDNA 序列（GenBank 登录号：FJ222749），该序列全长 2 099 bp，由 1 677 bp 核苷酸组成的 ORF，编码558 个氨基酸。该基因与其它植物的线粒体ATP 合酶β亚基基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面 相似性较高。对来源于动、植物的28条线粒体ATP合酶β亚基基因编码区序列所构建的进化树分析表明，由线粒 体ATP合酶β亚基基因编码区序列所建立的系统关系树与真实的动、植物进化基本一致，龙眼处在双子叶植物中， 由于该基因在龙眼同科属的植物中为首次克隆，所以有自己单独的分支。qRT-PCR 结果分析表明，随着龙眼体胚 的发育，线粒体 ATP 合酶β亚基基因转录水平逐渐升高，到球形胚阶段达到最高，而后又急剧下降，到鱼雷形胚 阶段降到最低，子叶形胚阶段略有升高。【结论】龙眼线粒体ATP合酶β亚基基因与其它植物相应序列具有较高同 源性，在龙眼体胚发育过程中，以球形胚阶段的表达最高。 关键词：龙眼；体细胞胚胎发生；线粒体ATP合酶β亚基基因；基因克隆；实时荧光定量PCR Cloning of Mitochondrial F -ATPase Beta Subunit Gene from 1 Embryogenic Callus and Its Expression Analysis by qRT-PCR During Somatic Embryogenesis in Longan 1,2 1 1 1 1 LAI Cheng-chun , LAI Zhong-xiong , FANG Zhi-zhen , LIN Yu-ling , JIANG Shun-ri 1 2 ( Institute of Horticultural Biotechnolog