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Agilent Bio SEC 柱用于生物分子表征的孔 径优化 应用简报 生物制药 作者 前言 Keeley Mapp 尺寸排阻色谱 ( EC) 是一项使用水相洗脱液基于分子天然形态尺寸来分离蛋白质、寡核 安捷伦科技公司 苷酸和其它复杂生物聚合物的技术。对于离散分子量的分子，例如蛋白质，可以用 EC 对其单体、二聚体、聚集体和片段进行检测和定量。 表 列出了蛋白质测试混合物的组分。图 中所示为三种不同孔 孔径选择 1 1 径色谱柱获得的分离结果。100Å 色谱柱排阻了较大的球状蛋白 填料孔径的选择将影响 EC 的分离度。由于分离是基于溶液中分 质 （甲状腺球蛋白及其聚集体和丙种球蛋白），因此只适合分析 子大小的差异，所以样品必须能够进入到填料的多孔结构中。如 分子量小于 100000 的蛋白质。 果孔径太小，样品组分都被排阻在孔隙之外，将在死体积内被洗 脱，而如果孔径太大，各组分都能完全渗透到填料孔隙中，将很 难实现分离。本应用简报利用Agilent Bio EC-3 HPLC 色谱柱， 表 1. 峰识别和标准蛋白质混合物的分子量 展示了孔径对分离蛋白质和抗体的影响。该型色谱柱有 100Å 、 150Å 和300Å 孔径可供选择，适用于大多数多肽和蛋白质的尺寸 峰号 名称 分子量 排阻分离。 1 甲状腺球蛋白聚集体 2 甲状腺球蛋白 670000 蛋白质分离 3 IgA 320000 本实验中，我们使用了涵盖重组生物药物典型特性范围的标准蛋 4 IgG （丙种球蛋白） 158000 白质混合物。 5 卵清蛋白 44000 条件 6 肌红蛋白 17000 色谱柱 ， ， （部件号 ） 7 维生素 B12 1355 Agilent Bio EC-3 100Å 4.6 x 300 mm 3 µm 5190-2503