大肠杆菌苹果酸合酶A酶学和生理功能的研究.pdfVIP

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2017-08-28 发布于安徽
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大肠杆菌苹果酸合酶A酶学和生理功能的研究.pdf

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28 2 V l. 28 N . 2 20 11 4 JOURNAL OF BIOLOGY Apr, 2011 d i10. 3969 /jissn2095- 1736. 201102039 A 1 1 2 1 , , , ( 1. 安徽师范大学生命科学学院, 芜湖 241000; 2. 芜湖市第二人民医院检验科, 芜湖 241000) : 苹果酸合酶是乙醛酸循环的键酶之一E. coli中苹果酸合酶A ( m alate syn thase A, MSA) 由 aceB 基因编码根据 E. coli基因组序列设计引物, 利用 PCR 技术扩增 aceB 基因, 并将其克隆入 pET - 29b ( + ) , 构建了重组表达质粒 pET - M SA经 IPTG诱导, MSA在 E. coliR setta ( DE3) 中获得高效表达纯化的MSA蛋白的分子量大小 2+ 约为 60 kDa, 最适反应 pH 值和最适温度分别是 pH 值 8030 纯化的蛋白质在M g 存在时才能发挥最大的活性, 其对乙酰辅酶A 的K 和 V 分别是 807 M 和 36 M /m in此外构建了M SA 和苹果酸合酶 G(M SG )基因敲 m max 除菌株MG: : aceB 和 MG: : aceBglcB研究发现缺少M SA 的E. coli突变菌株在乙酸中的生长速率要比野生型菌株慢很多, 表明M SA 对大肠杆菌在乙酸中的生长起着重要作用MSG虽然能部分补偿 MSA 的作用, 但是包含 M SA 的乙醛酸旁路是更有效的乙醛酸代谢途径 : 苹果酸合酶A; 表达; 动力学; 生长速率; 大肠杆菌 : Q78 : A : 2095- 1736( 2011) 02- 0039- 04 Characterization and phy siological role of m alate synthase A in E scherich ia coli 1 1 2 1 WANG Cheng, WANG A , ZHAO H an-jun, ZHU Gu -p ing ( 1C llege f L ife Sciences, AnhuiN rm alUn iversity, W uhu 241000; 2C linical Lab rat ry fWuhu Sec nd Pe ples H spita,lW uhu 241000, Ch ina) A bstrac t: M alate synthase is ne f the key enzym es in gly xylate cy cle. The aceB gene, enc d ing m alate synthase A ( MSA) , w as amp lified fr m the gen m ic DNA fEscherichia coliMG 1655 using PCR w ith prmi ers designed acc rd