大豆两个MYB 转录因子基因克隆及表达分析.pdf

中国农业科学 2008,41(4):961-970 Scientia Agricultura Sinica 大豆两个 MYB 转录因子基因的克隆及表达分析 1,2 3 4 1 2 2 杨文杰 ，杜 海 ，方 芳 ，杨婉身 ，吴燕民 ，唐益雄 1 2 3 （四川农业大学生命科学与理学院，四川雅安 625014 ； 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081 ； 四川农业大学玉米研究所， 4 四川雅安 625014 ； 哈尔滨工业大学（威海）海洋学院，山东威海 264209 ） 摘要： 【目的】克隆新的植物 MYB 转录因子基因，进行序列分析，并对其功能进行初步鉴定。 【方法】RT-PCR 法结合RACE-PCR法分离克隆 MYB 基因cDNA全长序列；酵母系统检测其转录激活活性；半定量RT-PCR检测目的基 因在植物体中的表达情况，及对类黄酮代谢途径中生物合成酶的影响。 【结果】根据植物中 MYB 基因 DNA 结合域 保守区设计简并引物，以大豆品种中豆 27 的叶片为材料，RT-PCR 扩增出两个 MYB 基因同源片段；据此设计基因 特异引物，通过RACE-PCR分离克隆出两个新的 MYB 基因 GmMYBZ1、GmMYBZ2。酵母系统检测表明，GmMYBZ2 具有转 录激活功能，β－半乳糖苷酶活性为 10.35 U；半定量 RT-PCR 在中豆 27 的茎和叶中检测到 GmMYBZ1 的表达，而 GmMYBZ2 在植物的根、茎、叶及未成熟种子中均有表达；对转基因烟草的 RT-PCR 检测结果显示，GmMYBZ2 的表达 可抑制类黄酮代谢途径中 PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F4H 及 FLS 等生物合成酶基因的表达。 【结论】从大豆栽培 品种中豆27中克隆出了两个新的MYB 基因 GmMYBZ1、GmMYBZ2；功能研究表明，GmMYBZ2 可能参与植物类黄酮合成 调控。 关键词：大豆；MYB转录因子；基因表达调控 Cloning and Characterization of Two New MYB Transcription Factor Genes from Soybean 1,2 3 4 1 2 2 YANG Wen-jie , DU Hai , FANG Fang , YANG Wan-shen , WU Yan-min , TANG Yi-xiong 1 2 ( College of Life and Science, Sichuan Agricultural University , Ya’an 625014, Sichuan; Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081 ; 3 Maize Research Institute, Sichuan Agricultural University , Ya’an 625014, Sichuan; 4Marine College, Harb