重庆大学研究生植物组培.docVIP

重庆大学研究生专业实验教学 实验报告书 实验课程名称： 植物基因组DNA的提取 实验指导教师： 李正国 学 院： 生物工程学院 专业及类别： 生物学 （学术） 学 号： 20131902031 姓 名： 实验日期： 成 绩： 重庆大学研究生院制 一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法和实验技术。 二、实验仪器设备 材料：番茄叶片 仪器： 1. 高速离心机 2．恒温水浴锅 3．高压灭菌锅 4.琼脂糖凝胶电泳系统 5. 凝胶成像仪 试剂： 1 TE Buffer 2 Lysis solution 3 氯仿 4 10×concentrated solution 5 1.2M Nacl solution 6 乙醇 7 去离子水 8 1%琼脂糖 9 1×TBE电泳缓冲液。 三、实验原理 利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。TE Buffer 即tris-EDTA缓冲液，能抑制DNA酶的活性。Lysis solution即细胞裂解液，含有的CTAB，1M Tris－HCl，NaCl，0.5M EDTA等成分。CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。再用氯仿抽提的方法去除蛋白。用10×concentrated solution 将所得DNA浓缩，最后将得到的DNA溶液经乙醇沉淀，去离子水洗脱。 四、实验内容 1) 称取100 mg幼嫩叶片，液氮磨样，放于2 mL离心管，用200 μL TE Buffer重悬； 2) 加入400 μL Lysis solution，65℃水浴10 min，其间混匀2-3次； 3) 迅速加入600 μL氯仿，轻柔颠倒3-5次，于4℃，10000 rpm，离心2 min； 4) 准备沉淀溶液：80 μL 10×concentrated solution, 加入720 μL去离子水，并混匀备用； 5) 将上清液转入新的离心管，加入800 μL新鲜的4) 步骤所准备的溶液，轻柔混匀若干次（1-2 min），于4℃，12000 rpm，离心2 min； 6) 去除上清液，不晾干，用100μL 1.2M NaCl solution 溶解DNA沉淀并轻柔涡旋； 7) 加入300 μL预冷的乙醇之后，置于-20℃沉淀30 min，于4℃，12000 rpm，离心5 min；去掉乙醇，放置空气中晾干； 8) 用30 μL灭菌的去离子水溶解DNA并轻柔涡旋，立即存放-20℃冰箱备用。 五、实验数据 六、数据处理及结果分析 B代表本组结果。1、上图是分别是组所提番茄叶片基因组DNA电泳结果，从电泳图上可以看出，这组所提的DNA质量均较好，DNA条带清楚、单一，效果较好、在离点样孔很近的地方带出现， 七、实验小结 1. 在磨样过程中应将样品磨得很细，直至样品发白时再将其装入管中，以便DNA能够很好地提取出。 2. 注意移液器的正确使用。 3. 由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA降解。 4. 提取植物基因组DNA的时候，要加入适量的RNA酶。 番茄叶片基因组DNA电泳图