靶向C区的小发卡RNA体外对耐药乙型肝炎病毒的抑制作用.pdfVIP

·1706· ·论著· DOI：10．3969／j．issn．1003-515X．2011．22．006 靶向C区8弋Jd＼发卡RNA体外对耐药乙型肝炎病毒的 抑制作用 任广立1”，方 颖3，马恒颢1，张卫云4，王鲜艳1，许蔓春1，罗爱武1，赵树进5，白雪帆6 510010；6．第四军医大学唐都医院全军感染病中心，西安710038) 新的抗病毒治疗手段。方法从临床耐拉米夫定患儿中提取耐药HBV基因组，经高保真重复延伸及序列拼接后测序，纯化并克隆 到pGEM—TEasy HepG2细胞系中HBV基因全序列，设计构建针对HBV 接入pSilencer—CMV4．1载体。中量超纯提取质粒，定量后与转染试剂siPort 胞。分别设立正常HepG2组(未转染组)、载体阴性对照组及共转染组。在共转染后的不同时间点，应用Westernblot检测细胞中乙 肝病毒表面抗原(HBsAg)蛋白、乙肝病毒e抗原(HBeAg)蛋白的表达；应用实时荧光定量PCR定量检测细胞上清中HBVDNA拷贝 的变化。结果构建的耐药HBV表达载体用于转染HepG2细胞，在转染后的第7天至下次传代前该细胞中可检测到稳定表达的 HBV DNA，HBsAg、HBeAg可检出。Western siRNA可作为耐拉米夫定HBV的一种有效的基因治疗措施。 实用儿科临床杂志．2011．26122)：1706—1708 关键词：乙型肝炎病毒；小干扰RNA；基因治疗；耐药；HepG2细胞 中图分类号：R725．7 文献标识码：A 文章编号：1003—515X12011)22—1706—03 InhibitionEffectofShort RNA BVirusCGeneon BVi— HairpinTargetingHepatitis Drug—ResistantHepatitis rnsinvitro REN Guang—lil’2，FANG rin93，MAHeng—ha01，ZHANGWei—yun4，WANGXian—yanl，XUMan—chunl，LUOAi—wul，ZHAOShu一面5， BAI Xue—fan6 of of Commandof (1．DepartmentPediatrics，GeneralHospitalGuangzhouMilitary PLA，Guangzhou 510010，GuangdongProvince，China；2． Sciencesand ofSouthChina of Biological EngineeringCollege UniversityTechnology，Guangzhou510640，GuangdongProvince，China；3．De— of of Medical of partmentProsthodonties，DentalHospitalGuangzhouCollege，Guangzhou510140，Guangdong Clinical Command Laboratory，General HospitalofGuangzhouMilitary ofPLA，Guangzhou510010，Guangdong ofPharmaceutical of Commandof 5 PreparationSection，