人Mad2基因正义真核表达质粒的构建及其对人卵巢癌细胞A2780紫杉醇敏感性的影响.pdfVIP

中国癌症杂志 2010年第20卷第10期 《 》 CHINA ONCOLOGY 2010 Vol.20 No.10 733 人Mad2基因正义真核表达质粒的构建 及其对人卵巢癌细胞A2780紫杉醇 敏感性的影响 郝星　叶双梅　周志刚　周婷　卢运萍　王世宣 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科，湖北 武汉 430030 　　［摘要］　背景与目的：紫杉醇是一种高效广谱的抗肿瘤药物，已常规应用于卵巢癌的化疗。但近年来随 着耐药的发生，紫杉醇耐药已成为影响肿瘤化疗预后的主要难题，有研究显示紫杉醇药效的发挥与纺锤体检测 点功能完整性相关。本研究通过构建人纺锤体检测点蛋白Mad2基因正义真核表达质粒，旨在探讨Mad2蛋白对人 TM 卵巢癌A2780细胞株紫杉醇敏感性的影响。方法：构建pEGFP-Mad2正义表达质粒，通过脂质体Lipofectamine 2000将其转入体外培养的人卵巢癌细胞株A2780中，应用RT-PCR、Western blot等方法分析相关基因和蛋白水 平的变化情况；通过流式细胞术比较稳筛细胞对紫杉醇敏感性的改变情况。结果：成功构建了pEGFP-Mad2正 义表达质粒；并筛选出稳定高表达Mad2的细胞株。RT-PCR、Western blot检测均显示稳定筛出的pEGFP-Mad2/ A2780细胞株中Mad2呈高表达。流式细胞术检测结果显示，紫杉醇作用24或48 h后，对照组pEGFP-N1/A2780的 细胞凋亡率分别为12.34%和58.76%，而pEGFP-Mad2/A2780组细胞凋亡率则分别为27.32%和87.53%，差异有统计 P 学意义( 0.05)。结论：pEGFP-Mad2正义表达质粒能够有效上调A2780细胞中Mad2基因mRNA和蛋白的表达，并 增加人卵巢癌细胞A2780对紫杉醇化疗的敏感性。 　　［关键词］　卵巢癌；　紫杉醇；　耐药；　Mad2基因 　　中图分类号：R737.31；R73-36　　文献标识码：A　　文章编号：1007-3639(2010)10-0733-06 Construction of human Mad2 sense eukaryotic expression vector and its effect on the sensitivity to paclitaxel in human ovarian cancer cell line A2780 HAO Xing,YE Shuang-mei,ZHOU Zhi-gang,ZHOU Ting,LU Yun-ping,WANG Shi-xuan (Department of Obstetrics and Gynecology, Tongji Hospital, Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology, Wuhan Hubei 430030, China) Correspondence to：WANG Shi-xuan　E-mail：wang_shixuan@ 　　［Abstract ］ Background and purpose ：Paclitaxel, one of the broadest spectrum anticancer agents, is effective in the chemotherapy of patients with ovarian cancers which kills cancer cells by disrupting microtubule dynamics. With the increasing of