细菌 blaNDM-1基因 PCR 检测方法的建立及应用.pdfVIP

， ， （ ）： ２０ １ ３ ３４ １ ２ １ ４５１ ４９ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 细菌ｂｌａＮＤＭ１ 基因ＰＣＲ 检测方法的建立及应用 １ １ ２ １ １ １ １ １ １  温肖会 ，翟少伦 ，丘 婷 ，吕殿红 ，贾春玲 ，袁 洁 ，黄 忠 ，周秀蓉 ，魏文康 　 　 　 （ 广东省农业科学院动物卫生研究所，广东广州 ； 华南农业大学兽医学院，广东广州 ） １ ． ５ １ ０６４０ ２ ． ５ １ ０６４２ 摘 要：为了调查养殖场和农贸市场中的耐药细菌是否携带 ｂｌａＮＤＭ１ 基因，根据 ＧｅｎＢａｎｋ 已公布的 　　 　 ｂｌａＮＤＭ１ 基因序列设计 ＰＣＲ 引物，优化 ＰＣＲ 反应体系和反应条件，建立了 ｂｌａＮＤＭ１ 基因的 ＰＣＲ 检测方法，以 人工合成的 基因作为阳性质控品，以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和铜绿假单胞菌等 株 ｂｌａＮＤＭ１ ４ 标准菌株为阴性对照，验证耐药细菌 ｂｌａＮＤＭ１ 基因 ＰＣＲ 检测方法的特异性、敏感性、重复性，并对 ２２ ９ 株大肠 埃希菌分离株和 株链球菌分离株进行检测。结果表明， 基因 检测方法的特异性、敏感性、重 ３ １ ｂｌａＮＤＭ１ ＰＣＲ 复性试验均成立，该方法扩增的目的基因片段为 ２４１ ｂｐ ，能检出的最小基因组 ＤＮＡ 浓度为 ９ ．１ ８ ×１ ０ －７ ／ ； 株大肠埃希菌分离株和 株链球菌分离株 基因 检测结果均没有出现目的条带，表 ｇ Ｌ ２２ ９ ３ １ ｂｌａＮＤＭ１ ＰＣＲ μ μ 明从广东省部分地区分离到的细菌分离株中没有携带ｂｌａＮＤＭ１ 基因。该方法可作为耐药细菌 ｂｌａＮＤＭ１ 基因的 早期检测、快速筛查手段在兽医临床耐药细菌检测中应用。 关键词： 基因；耐药细菌；聚合酶链反应 ｂｌａＮＤＭ１ 　　 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５ ２ ．６ Ｒ９ １ ５ Ａ １ ００７５０３８ ２０ １ ３ １ ２０ １ ４５０５ 近年来，出现了一种携带 （ ｂｌａＮＤＭ１ Ｎｅｗ Ｄｅｌｈｉ 　　 １ 材料与方法 　 ｍｅｔａｌｌｏｌａｃｔａｍａｓｅ１ ）基因的细菌，医学临床上多 β １ ．１ 材料 　 为使用碳青霉烯类抗生素治疗无效的大肠埃希菌和 １ ．１ ．１