雷公藤红素对肝星状细胞增殖及其α-SMA表达的影响.pdfVIP

2013V01．20No．3 。257· 中国中医药科技2013年5月第20卷第3期May 雷公藤红素对肝星状细胞增殖及其 OL‘’。。SMA表达的影响 陶兴飞 李晓飞△ 楼莲青朱锦宏 陈永薪 (浙江省义乌市中心医院·义乌322000) 摘要目的：探讨雷公藤红素抗肝纤维化的作用机制。方法：活化的HSC—T6细胞分别加不同浓度的 雷公藤红素进行培养，采用MTT法检测HSC—T6细胞的增殖情况，采用免疫组化法检测a一平滑肌肌动 藤红素对肝星状细胞HST—T6增殖的抑制率分别为6．97％、13．01％、18．23％，显著高于对照组，与药物 浓度呈正相关。雷公藤红素2．5、25、50彬IIll浓度培养的HSC—T6细胞的仅一SMA阳性表达率明显下 降，与空白组比较差异有统计学意义(P0．05)。结论：雷公藤红素能够抑制肝星状细胞活化及增殖，抑 制d—SMA表达。 主题词 雷公藤红素／药理学 星形细肜药物作用 体外研究 肝纤维化是多种慢性肝病的共同特征…，如何抑制 藤红素(2．5、25、50峙／“)，每组设置3个复孔，培养24小时。 HSC的活化与增殖、诱导肝纤维化逆转是肝纤维化治疗的重 2．3观察指标检测 要途径。雷公藤红素目前已分离出70多种化学单体，具有 2．3．1 细胞增殖的检测 M1-r法。弃去上清液，每孔加 抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫抑制等作用心J，尤其是诱导肿瘤 49／L 细胞凋亡作用受到广泛关注，但是其对肝纤维化的作用机制 4小时，弃去上清液，加100止／孔DMSO振荡，进行溶解，酶 研究较少。本文通过传代培养HSC—T6细胞，研究雷公藤标仪490nm波长测各孔吸光度值。对照组只添加等体积 红素的抗肝纤维化作用并探讨其作用机制。 DMSO。 l材料 2．3．2HSC—T6细胞a—SMA的测定免疫组化测定。 1．1细胞系大鼠HSC系HSC—T6：广州中医院提供。 2．4统计方法采用SPSSl2．0软件进行统计意义分析，数 1．2 药品及试剂 雷公藤红素：Sigma公司。噻唑蓝 据资料以(算±s)表示，采用方差分析进行处理。 (MTI)：购自Sigma公司；DMEM培养液：维森特公司；胎生 3结果 3．1 牛血清：Hyclone公司；小鼠抗大鼠d一平滑肌肌动蛋白(仅一 雷公藤红素对活化状态下肝星状细胞增殖的影响 随 SMA)单克隆抗体、即用型sP组化试剂盒：购自TOYOBO公 着雷公藤红素药物浓度的升高，肝星状细胞的增殖受到显著 司。 抑制，呈现浓度依赖趋势。见表l。 1．3仪器CO：恒温培养箱：美国Thermo公司；无菌超净表1 雷公藤红素对活化状态下肝星状细胞的抑制率 工作台：美国Thermo公司；YJ一1450型医用净化工作台：苏 州长春电子仪器厂；1X71型倒置相差显微镜：日本Olympus 光学仪器有限公司。 2方法 2．1 HSC一36的培养与传代采用含100U／ml链霉素、 3．2雷公藤红素对肝星状细胞Ot—SMA表达的影响随着 lOOU／ral青霉素、10％胎牛血清的DMEM培养液，细胞在 雷公藤红素药物浓度的升高，雷公藤红素组肝星状细胞d— 37。C、5％CO，及饱和湿度下培养，隔日换液，待细胞生长满 SMA的表达强度呈现浓度依赖性抑制，见表2。 细胞培养皿底80％～90％时