变异猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测方法的建立.pdfVIP

中国磨亏c萋搪 2010，26(5)：1-4 ChineseAgriculturalScienceBulletin 变异猪繁殖与呼吸综合征病毒 RT—PCR检测方法的建立 王隆柏 一，庄向生 ，车勇良 ，魏 宏 ，陈如敬 ，-，周伦江 (福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州 350013； 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州 350013) 摘 要：根据GenBank已发表及笔者所在研究室分离鉴定的变异猪繁殖与呼吸综合征病毒的NSP基因 序列，设计并合成了一对引物，建立了一种鉴别PRRSV的RT-PCR检测方法。结果表明：该方法扩增变 异PRRSV基因组时可获得217bp的片段，扩增普通PRRSV时则获得307bp的片段，同条件扩增猪瘟病 毒(CSFV)、圆环病毒II型(Pcv：)、伪狂犬病病毒(PRV)均为阴性；该体 系可检测到2．6pg的PRRS病毒核 酸，具有较高敏感性。对2007--2008年送检的40份临床样品进行检测，结果检 出12份为变异PRRSV， 其阳性率为30．0％。研究结果表明，建立的RT-PCR鉴别变异PRRSV方法具有特异性强、敏感性高、重 复性好等特点，适用于对猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴别诊断。 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒；RT-PCR；建立 中图分类号：$85 文献标志码 ：B 论文编号：2009．2082 EstablishmentoftheVariantPorcineReproductiveandRespiratory SyndromeVirusbyRT-PCRAssay WangLongbai，ZhuangXiangsheng ，CheYongliang ，WeiHong，ChenRujing一，ZhouLunjiang’ (Instit~eofAnimalHusbandryandVeterinaryMercia,Fu~anAcademyofAgricultureSciences，Fuzhou350013； FujianAnimalDiseaseControlTechnologyDevelopmentCenter,Fuzhou350013) Abstract：Apairofprimerswasdesigned，basedontheNSP2genesequenceofPRRSVpublishedinGenbank andRT—PCR assaywasdevelopedtodistinguishcommonPRRSV andvariantPRRSVwhichwasisolatedfrom Fujianprovince．217bpspecificallyfragmentand307bpfragmentwereamplifiedfromvariantPRRSVand classicalform respectively．Negativeresultsweref0undonCSFV，PCV2andPRV．Thedevelopedmethodwas sensitivetodetecttheRNA aslowas2．6pg．40clinicalspecimensofsickpigsweretestedbythemethodfrom 2007to2008，30percentofthem werepositiveofandvariantPRRSV．variantPRRSV．Theresultsshowedthat RT—PCRassayishighspecificity，sensitivityandreproducibility，andthedevelopedmethodcouldbeusedto differentiatebetweencommonPRRSV． Keywords：porcinereproductiveandrespiratorysynd