DNA氧化损伤标记物8-羟基脱氧鸟苷毛细管电泳安培检测方法研究.pdf

DNA氧化损伤标记物8一羟基脱氧鸟苷的毛细管电泳安培检测方法研究 摘要 毛细管电泳是上世纪80年代建立并迅速发展起来的一种新型分离分析技术，具有 分离效率高、分析速度快、重现性好及样品用量少等特点，己广泛应用于化学、生命科 学、药物和环境分析等领域。 研究表明，活性氧自由基(reactive oXygen H202、RO。、R00‘等可导致DNA氧化损伤，这与衰老、肿瘤的发生、恶变以及糖尿病 和心血管疾病等密切相关。在二十多种DNA氧化损伤产物中，8一羟基脱氧鸟苷 与修复过程中，导致鸟嘌呤与胞嘧啶及腺嘌呤与胸腺嘧啶发生错位(G：C_÷A：T)，碱基脱 落及DNA链断裂，诱发DNA点突变有关。8-OHdG将是一种很好的评价致突变和癌变危 险的标记物。由于尿中的8-OHdG不能被进一步代谢，因此尿中8-OHdG对评价个体癌 变危险或诊断与氧自由基相关疾病方面是一种很有用的标记物，在临床上具有很高的应 用价值和推广意义。 要将8-OHdG作为肿瘤标记物用于临床常规诊断，首先要建立一种分析速度快、分 离效率高、灵敏度高、选择性好、价廉、易商品化、可用于常规分离检测8-OHdG的方 法。本论文的主要工作就是发展了一种基于分子印迹萃取、毛细管电泳．安培检测 (capillaryelectrophoresis．amperometricdetection，CE．AD)联用方法。利用一步分子印记固 相微萃取预处理尿样，结合毛细管在柱富集技术——动态pH调节进样(dynamicpH ．junction)，进一步提高了方法的灵敏度，使其检测限达到2．6 浓度在10nmol／L～1．5 I．tmol／L浓度范围内与其峰面积呈现良好的线性关系(R=0．9999)； 迁移时问和峰面积的相对标准偏差分别为1．1％和4．0％，尿样的加标回收率为85．1％。 论文中详细讨论了分离电压、检测电位、缓冲液浓度及pH值等因素对分析的影响，确 定了最优化的分离检测条件。本方法具有简单、灵敏而高效的特点，并已用于健康人和 癌症患者尿中8-OHdG水平的评价，结果令人满意。 论文的另外一部分工作是研究了两种毛细管电泳在柱富集方法(场放大样品堆积和 碱堆积)在测定8-OHdG中的应用。论文中详细讨论了两种技术的富集原理，以及各种 实验条件对分离检测的影响。在优化的条件下，两种方法对8-OHdG的富集均可以达到 20倍。 关键词：毛细管电泳：8-OHdG；在柱富集技术；柱端安培检测；分子印迹 DNA氧化损伤标记物8一羟基脱氧鸟苷的毛细管电泳安培检测方法研究 Abstract a whichwas new-style established Capillaryelectrophoresis(CE)isseparationtechnique and inthe 1 hasbeen usedinthefields developedearly980’S．Nowadays，CE quickly widely of andSO toits chemistry，lifescience，pharmaceutics，environmentanalysison，due charming of small advantageshighseparationefficiency，shortanalytical resolution，and time，good for requirements sam