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提高细胞培养技术的关键点 为什么要培养细胞 ？ 体外培养的主要应用 研究研究: 研究研究 • 细胞行为 • DNA 复制 • RNA 转录 • 蛋白转化 • 信号转导 • 细胞和环境间相互关系 • 药物作用，感染，细胞毒性，受体/配体关系 • 细胞-细胞相互作用 • 基因组学和蛋白组学 产生产生: 产生产生 • 细胞系，细胞产品，细胞分泌的产物等 • 蛋白，DNA, RNA, 抗体，转染蛋白产物 体外培养技术需要标准化 • 在更接近生理学特性的环境中培养 = 增加实验数据的价值 （数据的可利用性） = 增加实验数据的价值 （数据的可利用性） • 在可控制的环境中培养 = 有利于可变参数或评估参数的定义 （控制可 = 有利于可变参数或评估参数的定义 （控制可 变量 ） 变量 ） • 在优化的环境中培养 = 增加信噪比 = 增加信噪比 体外培养技术需要标准化成本降低 例如例如：： 例如例如：： 开发一个新药需要：~11年，~$ 800 M* 其中：39%费用来自待选药物从ADME到临床的失败** 体外预估数据10%的提高，意味着上百万成本的降低 *数据来源：Tufts Center for Study of Drug Development / **数据来源： Price Waterhouse Coopers 1999 体外培养相关数据的影响因素 • 细胞来源 • 原始生长条件 • 培养基组成 • 细胞计数方法 • 生理参数 • 种属特性 • 年龄，染色体组型 • 培养介质，基质导致的形态学差异 • 回收方法 • 污染控制 （操作） BD™ Human Umbilical Vein Endothelial Cells, 354151 • 冻存技术 细胞来源 细胞来源细胞来源: 细胞来源细胞来源 首次传代前，从器官内分离 • 分离技术 • 种属 • 批次/供体 细胞系细胞系: 细胞系细胞系 首次传代后繁殖 MCF-7 (breast cancer cell line) labeled with Hoechst (blue), Mitotracker green (green) and wheat germ • 储存条件 agglutinin (red) BD Pathway™ 855 Bioimager • 交叉污染 细胞来源:组织来源 内皮细胞 细胞来源:分离技术 原代小鼠肝细胞 胶原酶灌注激活了早期 生长应激基因 (c-jun, jun-b, c-myc) Basabi Rana, et. al. MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, Sept. 1994, p. 5858-5869 细胞来源:种属 • 针对不同实验选用合适的种属 • 例如，体外生物利用度检测需要 •