大鼠背根神经节离散神经元差速贴壁纯化及纯化培养相关因素对整节培养中β3-tubulin阳性轴突综合及影响.pdfVIP

大鼠背根神经节离散神经元差速贴壁纯化及纯化培养相关因素对 整节培养中p3．tubulin阳性轴突的综合影响 摘 要 目的：探究：1．相对简洁有效的背根神经节神经元细胞纯化方式；2． 神经元培养体系内相关因素对p3．tubulin阳性神经轴突生长状态的影响。 方法：1．(1)显微操作取新生SD大鼠背根神经节，经消化，离心后制成 及I型胶原蛋白三种底物组背根神经元与非神经元细胞的贴壁数量。2． (1)显微操作下取新生SD大鼠背根神经节，制成培养用组织块；(2)通 过完全随机设计分组观察培养72小时后，底物、血清、有丝分裂抑制剂 对背根神经节整节培养中p3．tubulin阳性轴突生长长度和分枝情况的影 响。结果：1．(1)30分钟时平均每视野神经元细胞贴壁数量：PDL组为 18个，PDL．LN组为25个，I型胶原蛋白组为5个；平均每视野非神经 为11个，其中PDL组30分钟时相，神经元和非神经元细胞贴壁数量差 组为37个，I型胶原蛋白组为40个，其中PDL．LN组两类细胞贴壁数 量差异有统计学意义(PO．05)，但贴壁神经元细胞数大于非神经元细胞 数；(3)100分钟时平均每视野神经元细胞贴壁数量：PDL组为236个， 时轴突生长分化情况最好，单位末梢数量均值为0．243个／微米，轴突长 计学意义；(2)血清浓度为5％时单位末梢数量最大，为0．250个／微米， 209mol／L水平组的0．127个／微米，而轴突长度在10I-tmol／L水平时最长， 片上差速贴壁30分钟，再将悬液吸出进行接种培养，可以在一定程度上 起到分离纯化神经元细胞的作用。2．在进行DRG整节培养时，选择神 Ara．C的培养因素组 经元专用培养基+PDL．LN细胞培养底物+101amol／L 合，可获得最理想的p3．tubulin阳性轴突生长分化效果。 关键词：背根神经节；整节培养；差速贴壁；胎牛血清：五氟尿嘧啶； 阿糖胞苷 TheResearchofRatDRGNeuronPurificationviaDifferential Attachmentand Influenceof PositiveAxonfrom Complex p3一tubulin PurificationCultureFactorsinDRGTissueCulture Corresponding findouta methodto the neurons；2． simple purify Abstract：Objective：1．To Toresearchthe lexinfluenceon axon comp 133-tubulinpositive by culturefactorsinDorsalroot correspondingpurification culture．Methods：1．(1)TheDRGswereobtainedfromtheneonatalSD DRGsweremadeintocell via microscopically，then，the suspension and amountofattachedDRGneurons collagenase centrifuge；(2)The digestion ofthreedi