产CLA植物乳杆菌诱变后LAI基因mRNA差异性分析.pdfVIP

摘 要 共轭亚油酸 （Conjugated linoleic acid, CLA）是一种不饱和脂肪酸，具有抗 癌，抗氧化、抗动脉粥样硬化、增强免疫力、提高骨骼密度、防治糖尿病、降低胆固 醇、促进生长发育等生理功能。CLA 主要来源于反刍动物食品，但牛乳中的 CLA 水平 相当低。添加化学合成的 CLA 可以提高乳中 CLA 含量，但是副产物难以处理，甚至有 些化学原料会有一定的毒性 。 自然界许多微生物能够利用自身的酶将亚油酸 （linoleic acid, LA）转化成 CLA。目前，人们将获得 CLA 的注意力更多地转向了 可食用的微生物，植物乳杆菌就是其中的一种。 + 本研究从实验室保藏的植物乳杆菌 P8 出发，利用 N 离子束诱变技术对其进行诱 变处理，筛选出 CLA 产量下降的负突变菌株，进行 50 代的稳定遗传。克隆野生型菌 株亚油酸异构酶基因，构建质粒标准品，用实时荧光定量 PCR 检测负突变菌株和野生 型菌株 LAI 基因 mRNA 表达的差异性。为探索产生 CLA 的分子基础提供理论依据，也 为大力开发我区乳酸菌资源生产富含 CLA 保健乳提供技术支撑。 研究结果表明: -3 （1）在真空度为 10 Pa ，能量为 15-20keV ，束流为 15mA，采用脉冲方式，离子 13 + 2 束注入剂量为 30~190 ×2.6 ×10 N /cm 9 个梯度分别处理样品，得到“马鞍型”存活曲 线。 （2 ）诱变处理后每个处理随机挑取 30 个菌，得到正突变菌株共 36 株，负突变菌 株共 66 株，其中最高产 CLA 正突变菌株和最低产 CLA 负突变株产 CLA 浓度分别为 0.2751mg/mL 和 0.0330mg/mL ，转化率为27.51%和 3.30% 。 （3 ）负突变菌株进行 50 次的传代后，有 5 株负突变菌株遗传稳定性良好。 （4）稳定遗传的 5 株负突变菌株与野生型菌株之间的起始拷贝数差异显著， (p0.05)，其中 9-6，9-7，9-25，9-26，4 株负突变菌株的起始拷贝数显著低于野生 型菌株(p0.05)，9-8 的起始拷贝数显著高于野生型菌株(p0.05)。5 株负突变菌株 的起始拷贝数之间差异也显著，初步表明mRNA 表达水平对 CLA 的产量有影响。 关键词：植物乳杆菌；LAI；离子束诱变；负突变菌株；RT-PCR；表达差异 Analysis of mRNA Differences of LAI Gene after Mutation in a Lactobacillus plantarum Producing CLA Abstract Conjugated linoleic acid Conjugated linoleic acid (CLA) is a kind of unsaturated fatty acid,with so many Physiological functions,such as anti-cancer, antioxidation, antiatherosclerosis, enhancing immunity, improving bone density, controlling diabetes, lowering cholesterol and promoting growth etc. CLA mainly comes from ruminant animal food, but the CLA level is quite low in milk. Adding chemosynthetic CLA can improve milk, but it is difficuLt to dispose by-products, even there will