三氧化二砷对人胃癌细胞端粒酶活性影响及端粒酶在人胃癌基因治疗中应用.pdf

兰氧他二磷黠人霉癌缨脆端粒酶活蠖蕊彰晌 及端粒酶在人胄癌基因治疗中的应用 博出生姓名：尹豢缓 穗等教绛：麓祥 教授 专监露称：孛海医缭舍褡床 摘 要 孛国镄绫蓬药学在菸溪黪瘸熬爨变装淫孛积鬈?丰富翡经验，冀溪法方药彝 各释治粼的遮餍寄毫年多独到之娥，这是审嚣医结含耱治耱癌鲍圭蘩基璇。积极窝 充分地汲椒现代科学技术，包括现代医学的一切先进成巢，开展胂瘤挟芷培本、 活盘亿淤、清热解毒、化痰去滋、以毒玫海、疏群疆气等治刚与免疫调节、微循 环、细胞生物学、分子生物学、生化学、基因工褴学等新技术的深入探讨，将对 薅瘥莲嚣辍壤，爨灌方法旋供瓣论证鼗掇，戳耀麓控熹《瘗症发生发震、爨盘复蓑 转移等方谣髂理论。良毒玻毒懿渗翔冕予蔑晷秘学褰率先采用§囊霜(三裁纯二碡) 疗法，谯治疗急瞧翠幼粒绷臆囱斑病中己献缨臆稿分子生物学翡角度麓明了作焉 机理，其制剂亚砷酸注射液被批准为我圈二类新菊，为美国食晶与鲻晶管理局 (FDA)拦戴懿壤应震。戳耩疗法两手蔑精翳癃、潜巴系统瓣瘸霹麓礴效，‘为其 它滇纯遵瓣癌、安钵癌熬瀣疗镑来灌毙。 霉瘗在我鏊备耪恶搜瓣瘿巾占蓄整，簿年露予褥瘘数患者终16万。遴憩，针 对胃癌治疗的研究成为临床和基础研究工作的重点，特别是随着入类撼圜组计划 靛完成，蕊瓣淮疗将成魏。卡～瞧纪翳痰治疗匏熬患策臻。溃粒瓣燕一耱特殊豹 核糖核蛋国聚合酶，它能以自辫的RNA作为模檄裔成端粒，弥补端粒藏失，对维 蛰壤毅长壤；捷缎蕤获褥永燮健超重要圣挈建。鞴靛酶是迄今发臻懿一个最舞广漤 弱褥异懿麓薅拣恚耨，每续藏袭老、永熏证窝魏瘩夔发生、发震骞密甥关系。壤 簸酶之灏以耱成必耱癯演疗鹣激耗点。程予大多数疆常缀缓孛没肖滔燃或滔整掇 低，而85％以上的恶性肿瘸鼹肖很高的端粒酶活性。人的端粒酶复合物由多种成 telomerase 静缝成，键怒壤羧簿遂转交辩(human revc：t$e 楚控制端粒黪活技豹关键缓分。在缎胞永生和肿瘤滋展过程中糍粒酶的激活需要 瀵导hTERT戆表逮。最谶麓研究报道，hTERT蕊嚣毒端鞍骜活嫠其裔爨甥麓穗美 俊。因姥t利用hTERT蒸因臻为肿瘤治疗的靶点，将使熬因治疗鼹具肖明确的靶 惫性·蒸予j爨：愚鼹，我织茧怒磷突T--戴匏二秘辫入霹癌缨照端粒黪滋燃熬影噙 及可能的作用机制，为三氧化二砷作为端粒酶抑制剂用于胃癌的治疗提供新的理 论依据。其次，我们探讨了端粒酶逆转录酶基因在人胃癌细胞基因治疗中的作用。 论文一三氧化二砷对人胃癌BG-C．823细胞端粒酶的影响 目的研究三氧化二砷对人胃癌BGC一823细胞端粒酶的影响及可能的作用机 制。方法以不同浓度的三氧化二砷作用于人胃癌BGC一823细胞，通过MTT法测 PCR 定细胞活力；流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡：TRAP ELISA方法检测 的转录水平。结果三氧化二砷可明显抑制人胃癌BGC一823细胞的生长，诱导细胞 发生凋亡，引起细胞的端粒酶活性明显下降，显著抑制细胞hTERT基因的转录。 结论As203可明显抑制人胃癌BGC．823细胞的增殖，抑制作用随三氧化二砷浓度 的升高及作用时间的延长而增强。A8203可抑制BGC一823细胞的端粒酶活性， BGC一823细胞端粒酶活性的下调与心203作用时间和浓度有关，呈现明显的时间． 剂量效应关系。三氧化二砷对人胃癌BGC一823细胞的抑制作用可能是通过二条途 径实现：一是诱导细胞凋亡，另一个是通过下调hTERT基因mRNA的转录来下调 细胞的端粒酶活性。 论文二端粒酶反义hTERT基因逆转录病毒载体的构建 目的构建反义人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因真核表达载体。方法～步 法从人慢性髓原白血病细胞株K562细胞中提取总RNA，通过逆转录多聚酶链式 反应(RT—PCR)扩增出人端粒酶逆转录酶基因起始密码子至下游长156个碱基的 I III和Cla DNA片断，反