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通用电气医疗集团 应用指南 18-1177-27 AC 膜分离 可高压灭菌的超滤柱在单 克隆抗体生产中的应用 形势 GE Healthcare柱的理论截留分子量（NMWC ）为10,000 目前市面上有多种适用于单克隆抗体（MAbs ）生产的体 NMWC。生物反应器制造商A的柱也是10,000 NMWC ，制 外柱式生物反应器。每种均内嵌中空纤维膜，为培养基养 造商B的生物反应器则是30,000 NMWC。GE Healthcare的 分和气体交换、以及废物的排出提供交换界面。中空纤维 中空纤维柱是唯 一可高压灭菌的柱子。 实现了高细胞密度的生产，可得到高度浓缩、低血清且没 有外源的鼠源蛋白的产品。此外，中空纤维生产系统具有 操作步骤 扩展的灵活性，能从毫克级放大到公斤级。 9 首先将1.78×10 个细胞注入GE Healthcare滤柱的细管外空 间。无血清培养基持续从500 ml瓶进入滤柱的纤维管内循 然而，许多中空纤维生物反应器柱面临安装的挑战。因为 环。以“维持培养基葡萄糖水平高于2 g/L的速率” ，将新鲜 它们是通过γ射线灭菌的，而生物反应器安装时的辅助管 的培养基泵入，用过的培养基泵出。包含5%胎牛血清的培 及设备必须单独灭菌，一般在高压灭菌锅中进行。因而最 养基则以每天100-200 ml的速率缓慢通过超滤柱的管外空 后的系统必须在严格无菌的区域进行组装。 间。此培养基包含了浓缩的抗体产物。泵速相当慢，以防 那么通常用于纯化和分离的可高压灭菌的膜分离柱能否 止细胞从超滤柱的管外空间丢失。柱和循环培养基均置于 用于生物反应器呢？选择可高压灭菌的柱子能同时简化 Forma Scientific 3033恒温箱内并维持在37°C 。在这个生物 购买、储存的过程以及系统安装。 反应器的操作过程中，每天用YSI 2700 Select™生物化学分 析仪来监控葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺的水平。 解决方案：通用电气医疗集团的中空纤 在操作的前40天，生物反应器每天利用10g以上的葡萄 维超滤柱比生物反应器更胜一筹 糖。根据以往的研究，1×109个细胞消耗1 g葡萄糖。在之 一家机构利用通用电气医疗集团（GE Healthcare ）的UFP- 后的60天内，生物反应器一直维持这个葡萄糖利用速率， 10-B-8A超滤柱作为中空纤维生物反应器，来培养表达 说明在这一时期细胞数量保持不变。因为已经收集了足够 IgG2a抗体的大鼠杂交瘤细胞。UFP-10-B-8A超滤柱1.3 m2 的抗体产品，操作于此时终止。在整个100天的时间内， 的膜表面积相当于之前用于杂交瘤培养的两个生物反应器 消耗了600升无血清培养基，收集到7升包含条件培养基的 柱。而GE Healthcare柱的毛细管外空间为290 ml ，接近生 浓缩抗体。 物反应器厂家提供的柱子的三倍。 功能与生物反应器柱相当，甚至更佳 葡萄糖和谷氨酰胺的利用，以及乳酸的产生，都表明GE Healthcare柱的功能与专门的中空纤维生物反应器柱相 当，甚至更佳（图1）。 GE Healthcare中空纤维装置的操作方式与A和B