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第 30 卷 第 1 期 天津科技大学学报 Vol. 30 No. 1
2015 年 2 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Feb. 2015
DOI:10.13364/j.issn.1672-6510
瑞替普酶在乳酸乳球菌中的表达
何影影，罗学刚，倪 萌，马德云，王重喜，张同存
(工业发酵微生物教育部重点实验室，天津市工业微生物重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457)
摘 要 ：为建立溶栓药物瑞替普酶 (rPA)的乳酸菌表达系统，从实验室前期构建的大肠杆菌表达质 pET22b-rpa 上
扩增出目的基因 rpa ，将该基因与乳酸菌表达质 pCYT 连接 ，构建了 pCYT-rpa 质 ．此外 ，为提高 rPA 在乳酸乳球
菌 NZ9000 中的稳定性，同时构建了 rpa 位于葡萄球菌 (Staphylococcal)耐热核酸酶基因 nuc 下游融合表达的重组质
pCYT-nuc-rpa．将质 pCYT-rpa 和 pCYT-nuc-rpa 分别电转化至乳酸乳球菌 NZ9000 中，经 Nisin 诱导表达 ，Western
blot 结果显示 Nuc 可提高 rPA 在乳酸乳球菌中的稳定性 ，从而增加了 rPA 在乳酸菌中的表达量．重组 rPA 及 Nuc-rPA
在复性后均具有溶栓活性 ，活性分别为 800,U/L 和 1,000,U/L．
关键词 ：瑞替普酶(rPA) ；Nuc ；乳酸乳球菌；表达
中图分类号：Q786 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672-6510 (2015)01-0019-06
Expression of Reteplase in Lactococcus lactis
HE Yingying ，LUO Xuegang ，NI Meng ，MA Deyun ，WANG Chongxi ，ZHANG Tongcun
(Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology ，Ministry of Education ，Tianjin Key Laboratory of Industrial
Microbiology ，College of Biotechnology ，Tianjin University of Science Technology ，Tianjin 300457 ，China)
Abstract ：To establish an expression system of reteplase (rPA)in lactic acid bacteria (LAB) ，rpa gene was amplified from
pET22b-rpa ，a recombinant plasmid constructed in our previous study．After that ，the PCR product was ligated with Lacto-
coccus lactis expression vector pCYT ，which resulted in the recombinant plas
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