蜡样芽孢杆菌的检测.pptVIP

蜡样芽胞杆菌概述 一 形态与染色 营养要求不高，在普通培养基上可生长良好，最适宜温度为28~35℃。菌落较大，不透明，表面粗糙似毛玻璃状或蜡状，边缘常成扩展状。在普通肉汤上培养基呈浑浊生长，常形成菌膜或壁环，震摇易乳化。 三 流行病学 蜡样芽胞杆菌 实验原理：蜡样芽胞杆菌具有以下生化特性： 实验材料 实验步骤 1 样品的保存和送检 待检样品应保持在6℃以下运送并尽可能不使其冷冻。对可疑是该菌引起的食物中毒的病人，应取可疑食物或病患者的呕吐物、粪便，且立刻在3小时内送检。送达实验室后，应保存于4℃并尽快检验。 实验步骤 2：样品稀释及计数： 3 分离培养 计数后，从每个平板选取5个已计数的菌落分别接种于营养琼脂斜面做纯培养，30℃培养24h，进行形态观察和证实试验。 分类 需氧芽孢杆菌根据芽孢囊膨大与否及芽孢的形状，可将其分为3个群。第一群的芽孢不突出菌体，形成的芽孢为椭圆形或圆柱形；第二类的芽孢囊突出菌体，形成的芽孢为椭圆形；第三群的芽孢囊突出菌体形成的芽孢为球形。 蜡样芽胞杆菌属于第一群。该群内细菌，根据营养型细胞的宽度可以又分为两类，其中宽度≥0.9μm者称大细胞群，该群有蜡样芽胞杆菌、蕈状芽孢杆菌、紫云金芽孢杆菌、炭疽芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌。这几种与蜡样芽胞杆菌形态上相似的4个菌种必须用微生物学和生化学试验进行鉴别。 4 证实试验 1 形态观察 本菌革兰染色阳性，呈短链或长链，芽孢位于菌体中央或偏端，不是菌体胀大。 实验结果 3 计数（表面涂布法） * * （第一次课） 本菌是革兰氏阳性杆菌，1.0~1.2μm×3~5μm,菌体两端钝圆，有鞭毛，无荚膜，多成短链状排列。 本菌生长6小时以后可以既可以形成芽孢，形成的芽孢小于菌体横径，位于中心或稍偏于一端。 二 培养特性 病原菌 条件致病菌 肠毒素 耐热 不耐热 食物中毒 人或动物 非肠道传染病 eg:结膜炎 呕吐型 污染食品：米饭 我国多见 腹泻型 污染食品：蛋白型食品及果汁 欧美等国多见 污染途径： 泥土和灰尘 昆虫 不洁用具 不卫生的食品从业人员 实验目的 1、掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方法。 2、了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反应结果的判断方法。 不发酵甘露醇：在甘露醇-卵黄-多粘菌素（MYP）琼脂平板上生成微粉红色菌落。 产生卵磷脂酶：分解MYP琼脂中的卵磷脂，在菌落周围产生粉红色混浊环（沉淀环）。 产生酪蛋白酶：分解培养基中的酪蛋白，生成L-酪氨酸在菌落周围形成透明圈。 产生溶血素：使胰酪胨大豆羊血琼脂（TSSB）中的血细胞发生β溶血。 产生明胶酶：将明胶水解为多肽再水解为氨 基酸而使其由半固体转化为液态状。 触酶实验: 产生过氧化氢酶分解过氧化氢生成水和氧气。 动力和硝酸盐试验: 蜡样芽胞杆菌运动活泼,能还原硝酸盐为亚硝酸盐。 甘露醇-卵黄-多粘菌素（MYP）琼脂平板 营养琼脂培养基 L-酪氨酸营养琼脂培养基 胰酪胨大豆羊血琼脂(TSSB) 动力-硝酸盐生化鉴定管 木糖-明胶生化鉴定管 硝酸盐试剂(1%对氨基苯磺酸溶液, 0.2% α-萘胺溶 液) 3%的双氧水 革兰染液 检样 50g(mL)+450mL无菌磷酸盐缓冲稀释液 10-1~10-6稀释液 30°C , 24h 形态观察 菌数测定 选择性培养基 MYP 营养琼脂 30°C , 24h 证实试验 革兰染色 生长及菌落观察 鉴别试验 生化反应 肠毒素测定 报告 检验程序 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 9mL 9mL 9mL 9mL 9mL 各稀释度0.1mL，L型玻棒均匀涂布 MYP 琼脂平板 计菌落数 1 每个稀释度混匀吹打完毕 后换用另一只灭菌吸管。 2 每稀释度接种两个平皿。 30℃ ，24h 10-1 10-6 第二次课 L-酪氨酸琼脂培养基 预实验营养琼脂培养基 菌落形态观察 镜检观察菌体 生化实验 卵磷脂酶实验 L-酪氨酸分解实验 动力与硝酸盐还原实验 革兰染色 MYP琼脂平板 溶血实验 胰酪胨大豆羊血琼脂平板 触酶实验 双氧水 动力-硝酸盐生化鉴定管 鉴别试验 1 MYP平板上：粉红色菌落，菌落周围产生粉红色浑浊圈。 2 L-酪蛋白琼脂培养基：菌落周围形成透明圈。 3 触酶试验：加入过氧化氢后30秒产生气泡。 4 TSSB平板上：菌落周围产生的β溶血圈。（在菌落周围出现一个大小不一的完全透明清楚