药品微生物限度检查法.ppt

lb-04-12-24 药品微生物限度检查法 吉林省食品药品检验所 2008.3.29长春 微生物限度检查法起草的指导思想 较完善检查法：也是目前国际上常用的一种方法。是以琼脂平板上的细菌、霉菌或酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。该法测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌、霉菌和酵母菌的菌落数。 增加试验的可操作性 使方法更具科学性，保证检验结果的准确性。 洁净级别 检验量 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或 cm2） 一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；中药膜剂为50cm2 贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。 要求检查沙门菌的供试品其检验量应增加10g或10ml 特殊供试液制备方法 取供试品10g，加至含玻璃珠和20ml的无菌十四烷酸异丙酯的容器中，充分振摇，使供试品溶解，再加入约45℃的稀释剂，振摇5-10分钟，萃取，待油水明显分层，取其水层作为1:10供试液。 十四烷酸异丙酯的灭菌方法：采用薄膜过滤法除菌，选用孔径为0.22um的脂溶性滤膜，在140℃干热灭菌2小时。 特殊供试液制备方法 非水溶性膜剂供试品 取50cm2,剪碎，加适量的稀释剂（通常为每1ml或每2ml含1cm2）,浸泡，振摇，以供试品浸液作为1:10或1:20供试品。 特殊供试液制备方法 肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10g，加至100ml pH6.8磷酸盐缓冲液（肠溶制剂）中或pH7.6磷酸盐缓冲液（结肠制剂），置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1:10的供试液。 特殊供试液制备方法 具抑菌活性的供试品 当供试品有抑菌活性时，应消除其抑菌活性后，再依法检查。 常用的方法有：　　培养基稀释法　　　　　离心沉淀集菌法 3000转/分离心20分钟，500转/分离心5分　　　　薄膜过滤法　　　　中和法 菌数报告规则　 细菌数　酵母菌平均菌落数在30-300，　霉菌平均菌落数在30-100 之间的稀释级作为菌数报告的依据。 当仅有１个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。 菌数报告规则　 当同时有2个稀释级的菌落数符合上述规定时，视两者比值（比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值　）而定。若比值不大于2，以两稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均值报告菌数；若比值大于2但不超过5时，以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。当出现比值大于5或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明原因再行检查，必要时，应进行方法的重新验证。 菌数报告规则 当各稀释级的平均菌落数均小于30，以最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。 各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 菌数报告规则 各 操作要点 一个细菌、霉菌或酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而成，因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数（colony forming unity, cfu） ·供试品检验的全过程必须符合无菌技术要求。 培养基、稀释剂、实验器具等的灭菌，按灭菌法（见附录）的要求采用验证合格的灭菌程序灭菌。 操作要点 作供试品稀释时，每一稀释级都要更换吸管。 ·细菌培养48h，真菌培养72h，计数。如菌落极小，不易辨认可适当延长培养时间。再点计菌落数。 含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵菌数，并且合并计数。 若同一稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。 使用灭菌吸管时，管尖不要接触可能污染的任何容器或用具。 供试液稀释及注皿时应振摇后取均匀的供试液，以免造成实验误差。 操作要点 培养基的分装量不得超过容器的2/3以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。 ·培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。 ·灭菌后的培养基应保存在2-25℃ 防止被污染，可在三周内用毕。 已溶化的培养基应一次用完，一般开启后不宜再用，更不要反复加热溶化 注皿时培养基应在45±1℃，高于45℃时易造成细菌受损或致死，低于45℃时易凝固，影响混匀，因此使用前可用水浴保温效果较好。 倾注培养基于平皿中与样品摇匀时，切勿溅到皿盖边和皿盖上，以免影响实验结果。 操作要点 采用薄膜过滤法时，水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张