1-动物性食品中受体激动剂残留测定的标准操作程序.docVIP

动物性食品中受体激动剂残留测定的标准操作程序（GC/MS法） 1适用范围 本程序规定了动物性食品中10种受体激动剂残留的气相色谱—质谱仪测定方法 本程序适用于动物性食品中10种受体激动剂残留的测定。当试样取5.0g时，本方法10种受体激动剂的检测限为 0.5μg/kg。 2 原理 本方法采用β-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶解动物组织，然后通过固相萃取柱净化，用双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1%（φ）三甲基氯硅烷（TMCS）衍生后采用GC/MS测定动物组织中10种受体激动剂残留，同位素内标法定量。 3 仪器、设备与试剂 3.1.1 气相色谱质谱仪。 3.1.2 漩涡混匀器。 3.1.3 氮吹仪。 3.1.4 具塞刻度试管：10 mL。 3.1.5 固相萃取仪。 3.1.6 离心机: 最低转速8，000 r/min（最好冷冻） 3.2 试剂 除非另有说明，所有试剂均为分析纯。 3.2.1 甲醇。 3.2.2 盐酸。 3.2.3 正己烷。 3.2.4 乙酸乙酯（色谱纯）。 3.2.5 氨水（分析纯，要求新，没有开封过）。 3.2.6 无水硫酸钠，于450℃灼烧4 h，冷却后贮于干燥器中备用。 3.2.7 特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、马布特罗、西马特罗、班布特罗、克仑潘特、苯氧丙酚胺、卡布特罗；莱克多巴胺标准品。 3.2.8 D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇、D5-莱克多巴胺（D6-莱克多巴胺）内标。 3.2.9 β-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶购自Sigma或者MERCK(产品型号1.04114.0002)； 3.2.10 双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA） +1%（φ）三甲基氯硅烷（TMCS）。 3.2.11 SLW 固相萃取柱规格为500mg/6ml（杭州福裕科技服务有限公司）。 3.2.12 受体激动剂标准储备溶液：分别称取各种受体激动剂标准品10mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在-18℃冰箱中备用；受体激动剂混合标准使用液用甲醇稀释至0.1 mg/L。 3.2.13 D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇、D5-莱克多巴胺（1.0mg/L）受体激动剂内标混合液：使用时用甲醇稀释储备液至1.0 mg/L混合液。 4 样品处理 4.1 样品采集、制备、保存 动物组织(包括肌肉、肝脏、肾脏、肺等)采集200_500g,取肌肉部分用组织捣碎机（或者榨汁机）绞碎，四分法取50—100g，放在具塞玻璃瓶或者食品袋中，贴上标签后，放在-18℃冰箱冻藏。 4.2 样品酶解 称取5.0g经绞碎均匀的动物组织于50mL离心管中,分别加50μL 1.0 mg/L受体激动剂内标混合液，静置10min，加入15ml0.2mol/LpH5.2乙酸钠-醋酸缓冲液，用匀质机匀质20s，加入50μLβ-葡萄糖醛苷酶／芳基硫酸酯酶液，在37℃水浴中水解16h后取出冷却，8，000 r/min离心10min，分出上层溶液，（注意如果液面有脂肪析出，可以用棉花过滤）用2.0mol/盐酸溶液调节至2.0±0.1(pH测定仪)，再在8，000 r/min离心10min，分出上清液待用。 4.3 样品净化 取SLW（或者SLS）固相萃取柱，先用水5mL、甲醇5mL、水5mL、40mmol/L盐酸5mL活化柱子,然后将10mL上清液加到柱子上过柱,再用5mL水、5mL甲醇洗脱淋洗除杂，真空泵抽干5min，然后用10ml4%氨化乙酸乙酯（现配现用）洗脱收集，在50℃水浴中氮气吹干。 4.4 样品衍生 蒸发剩余物加0.1mL甲苯（色谱纯）、0.1mLBSTFA +1%TMCS，在80℃的烘箱中加热衍生1.0h。另外分别取标准溶液，加50μL内标使用液，氮气吹干后与样品同时进行衍生化。取1.0μL甲苯溶液进行GC-MS分析。 5样品分析 5.1 色谱质谱参考条件 HP—5 MS 5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)或等同柱；进样口温度: 280℃；柱温:初温100℃，保持3 min，然后以10℃／min升至280℃，保持5min,300℃postrun 5min；载气: 氦气，纯度≥99.999％，流速1 mL/min；进样量: 1-2μL；电离方式：EI源, 70eV。 离子源温度：230℃；进样方式：不分流进样;溶剂延迟：11 min。 5.2 选择离子监测方式:监测离子见下表 参考保留时间及监测离子 化合物 内标 保留时间 定量离m/z 定性离子m/z 检测限 μg/kg 马布特罗 D9—克伦特罗 11.39 86 277、296、367 0.5 特布他林 D3-沙丁胺醇 13.77 356 86、426、370 0.5 D9—