翻白草中的多糖的微波提取.docVIP

翻白草中的多糖的微波提取5)醇沉工艺：多糖是多羟基的醛或酮，可溶于水，但是 在多糖水溶液中加入乙醇会破坏多糖水溶液中的氢键，从而 降低多糖在水中的溶解度，使多糖以沉淀的形式析出，利用 多糖溶于水而不溶于高体积分数乙醇，可使多糖从水溶液中 沉淀出来，滤液加5倍量95％乙醇，放置过夜，离心，在 4 000 r／min下，离心15 min，收集沉淀。3 一 ，实验目的 二，实验原理：本实验运用微波技术对翻白草用石油醚、乙醚除去脂溶性杂质，用乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及苷类等干扰性成分后，再运用微波技术取得翻白草粗多糖，并采用酚% 硫酸比色法对其多糖含量进行测定。在单因素试验的基础上对料液比、溶剂，微波功率和处理时间对微波法提取翻白草多糖的影响进行研究，以期通过正交优化得到最佳的稳定化工艺参数。 三，实验材料与仪器：仪器：微波反应器，离心机， 10ml具塞比色皿，分光光度计，烧杯 ，分析天平，烘箱 冷冻干燥 药品：翻白草。葡萄糖，无水乙醇，石油醚，乙醚，蒸馏水，苯酚，浓硫酸，1%三氯乙酸，95 %乙醇，5 mol/L 的硫酸，碳酸钡，鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇、半乳糖、葡萄糖、木糖，盐酸羟胺，嘧啶，乙酸酐，氯仿，活性炭，铝片 四，实验步骤：1，预处理：取200 g干燥翻白草样品(事先洗净, 去除泥土等, 于30℃恒温晾干) , 使用研磨机充分粉碎后, 搅拌混匀，置于塑料容器内密封待用 2，多糖提取方法：翻白草多糖的提取工艺：翻白草干粉一加水-(设计固液比和其他溶剂)一微波提取2次一4000 r／min离心_取上清液与有机溶剂(氯仿与正丁醇体积比为5：1)混合，比例为5：l，剧烈振荡20 min--4000 r／min离心10 min，上清液为翻白草的多糖 提取液 3，多糖提取液的处理 3.1多糖除去蛋白质：取10 mg 翻白草多糖配制成200 mL 多糖溶液，加入1%三氯乙酸沉淀蛋 白质，离心过滤收集蛋白质，上清液中加入600mL 的95 %乙醇醇析，隔夜过滤，沉淀复溶后再进行醇析，如此反复2～3 次，最后将得到的多糖干燥待用。 3.2 多糖水解：称取20 mg 除去蛋白质的多糖干品，加入5 mol/L 的硫酸溶液5 mL，酒精灯封 管，在120 ℃的烘箱中水解4 h，取出冷却后，加入碳酸钡中和至中性，离心除去沉淀，上清液减压浓缩蒸干，得单糖放置干燥箱中备用。 3.3 标准单糖的衍生化：称取鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇、半乳糖、葡萄糖、木糖各10 mg，分别加入盐酸羟胺、20 mL 嘧啶振荡后90 ℃水浴加热反应30 min，冷却后加2.0 mL 乙酸酐于90 ℃水浴中酰化30 min，得到的产物减压蒸干，残留物加入2 mL 氯仿溶解，直接注入GC 分析。 3.4 样品单糖的衍生化水解： 翻白草单糖10mg，分别加入盐酸羟胺、20 mL 嘧啶振荡后90 ℃水浴加热反应30 min，冷却后加2.0 mL 乙酸酐于90 ℃水浴中酰化30 min，得到的产物减压蒸干，残留物加入2 mL 氯仿溶解，直接注入GC 分析。 4，多糖含量的测定 改良苯酚-硫酸法测定翻白草多糖的得率 4．1 标准曲线的绘制精密称取葡萄糖0.0106g，用蒸馏水配制成100 mL。分别吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 置25 mL 容量瓶中，稀释至刻度，再精吸2.0 mL 于试管中，另取2.0 mL 蒸馏水作空白对照。各加入苯酚试液1.0 mL，摇匀迅速滴加浓硫酸各5.0 mL，摇匀后放置5 min，置沸水中加热15 min，冷至室温后，于490 nm 处测定吸光度。以质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，葡萄糖在1.06～10.60 mg/L 之间线性关系良好。 4.2 提取物中多糖得率测定精密称取提取物约10 mg，加蒸馏水定容至100 mL，取出0.5 mL置于10 mL 具塞试管中，按4.1 节的操作，测得样品吸光度值，根据标准曲线求多糖的得率，公式为：粗多糖得率(%)=沉淀质量×多糖质量浓度÷称样量×100 百分五苯酚的配制 5，单因素设计