土壤微生物的分离及鉴定报告(吉林化工学院).docVIP

吉林化工学院化工与生物技术学院 微生物学实验报告 土壤微生物的分离、培养及鉴定 学生学号： 学生姓名： 潘洋 专业班级： 生工1201 指导教师： 许崇利、谢莹 吉 林 化 工 学 院 Jilin Institute of Chemical Technology 土壤微生物的分离、培养及鉴定 合作者：谢雨泽、徐财广 招聘行政人员，有意电话联 一、实验摘要 利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据菌落形态观察、染色鉴定以及一系列的生理生化试验的结果通过查阅《伯杰氏系统细菌学手册》对照种属特征最终判断所分离纯化的细菌所属的属。 1．了解培养基的概念、种类及用途 了解培养基的配制原理及其常规配制程序 巩固练习显微镜使用方法 ．学习和掌握细菌、放线菌、霉菌常用培养基的配制方法。 掌 握 细 菌 稀 释 分离 和 划 线 分 离 技 术，平 板 倾 注 法 和 斜 面 接 种 技 术，了 解 培 养 细 菌 的培养条件和培养时间，复习平板菌落计数法。 ．学习并掌握观察细菌、放线菌以及霉菌个体形态的基本方法。 ．初步了几种中细菌的个体形态以及与其相应的菌落形态特征。 培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基种类很多。不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养基的pH值。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。高氏一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。马丁氏培养基用于霉菌的分离培养。 对土壤中微生物的分离筛选及鉴定 土壤是微生物生活的大本营，它所含有的微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。 不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥、偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多。本实验从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌为了分离和确保获得某种微生物的单菌落，首先要考虑制备不同稀释度的菌悬液。各类菌的稀释度因菌源、采集样品的季节、气温条件而异。其次，应考虑各类微生物的不同特性，避免样品种各类微生物相互干扰。细菌或放线菌在中性或微碱性环境较多，但细菌比放线菌生长快，分离放线菌时，一般在制备土壤稀释液时添加10％酚或在分离培养基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌。 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株生物的过程成为微生物分离与纯化，常用的方法有简易的细胞挑取法和平板分离法。 本实验采用平板分离法，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化，其原以下两个方面： 在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂形成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物； 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体， 因此可通过挑取单菌落而获得纯培养，获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 但是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。 因此，纯培养的确定除观察其菌落的特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。有的微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。 1．材料与试剂 牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO4?7H2O、NaOH溶液（1mol/L）。 天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等。 铲去表涂层2～3cm，取3～10cm深层土壤10g。一、肉膏蛋白胨培养基的配制 1．培养基成分 牛肉膏 0. 3g 蛋白胨 1g NaCl 0.5g 琼脂 1.5g 水