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2 .2 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养与核移植技术 教学目标： 1.知识目标：简述动物细胞培养的过程、条件及其应用；简述克隆动物的概念含义和基本原理；简述体细胞核移植技术和动物克隆技术，以及应用前景。 2.技能目标：尝试进行动物细胞的培养。 3.情感目标：认同细胞核移植技术在克隆动物方面的应用。 教材分析： 重点：1．动物细胞培养的基本过程与条件。 2．用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 难点：1．动物细胞培养的基本条件。 2．原代培养与传代培养的区别。 教学方法：讲述、讨论、自主探究、学生练习 【课前预习】完成《能力测试与培养》之P27“自主探索学习”内容并思考： 1．动物细胞工程包括哪些技术手段？其中哪项技术是动物细胞工程的基础？ 学生回答： 2．动物细胞培养包括哪些基本步骤？什么是克隆？ 学生回答： 教学过程 【导学诱思】 动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 问题的提出：对严重烧伤病人如何获得大量的自体健康皮肤呢？参考图2-15 如何获得大量的纯度高的分泌蛋白呢？ 【知识归纳】 一、动物细胞培养： 1.动物细胞培养的概念： 就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增长。用于培养的动物细胞与组织大多取自动物胚胎或出生后不久的幼龄动物的器官或组织。那么，动物细胞培养的过程是怎样的？培养时又需要提供哪些必要的条件呢？ 思考与讨论1： 动物细胞培养的材料大多取自动物胚胎或幼龄动物的器官或组织，这是为什么？ 【分析】动物细胞培养的材料大多取自动物胚胎或幼龄动物的器官或组织，这是因为动物细胞培养的主要目的就是让动物细胞进行增殖，而动物胚胎或幼龄动物的器官或组织细胞增殖能力非常旺盛。 2.动物细胞培养的过程： 学生活动1： 阅读课本44-46页文字和图2-16，结合所学知识，思考以下问题： （1）在动物细胞培养的过程中所用的工具酶是什么？它有什么作用？说明细胞间的物质主要是什么成分？能否用胃蛋白酶代替？ 【分析】在动物细胞培养的过程中所用的工具酶是胰蛋白酶和胶原蛋白酶，它的主要作用是将动物组织分散成单个细胞；动物细胞间的主要物质是蛋白质。另外，在传代培养的过程中，利用胰蛋白酶处理还可以将动物细胞从培养瓶上脱落下来。由于胰蛋白酶与胃蛋白酶的最适宜PH条件不同，故不能用胃蛋白酶代替。胃蛋白酶的最适宜PH=2，胰蛋白酶的最适宜PH=8。 （2）“寻根问底”：胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 【分析】会消化掉。但只要作用时间不长，胰蛋白酶就不会把细胞消化掉。 （3）在培养瓶中动物细胞的分裂方式是什么？什么叫接触抑制现象？ 【分析】在培养瓶中动物细胞的分裂方式是有丝分裂。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象叫细胞的接触抑制。 补充完整。 原代培养 传代培养 1.胰蛋白酶 2.原代 3.胰蛋白酶 4.传代。 【分析】原代培养是指从供体获取组织或细胞后的初次培养，到出现贴壁生长为止。将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中继续培养，称为传代培养。（1）一般情况下，传代培养的动物细胞分裂10—50次后，细胞增殖会明显减缓，甚至完全停止。部分细胞核型可能变化。继续传代培养，可获得不死性（突变，向癌细胞方向发展）。 （2）10代以内的可保持正常的二倍体核型。 学生活动2： 阅读课本46页，结合所学知识，思考动物细胞培养需要哪些基本条件？ 3.动物细胞培养的条件： （1）无菌、无毒的环境：即对培养液和所有培养用具进行无菌处理。通常要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，还应定期更换培养液，以便清除代谢产物，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 （2）营养：动物细胞培养需要的营养物质主要有葡萄糖、无机盐、氨基酸、维生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生长因子等。由于人们对细胞所需要的营养物质还没有完全搞清楚，因此，在培养液中还需要加入少量的动物血清。 思考讨论2：为什么要加动物血清？（提供营养物质，创造适宜的培养环境） （3）温度和PH：培养细胞的最适温度为37℃左右，最适PH范围为7.2～7.4。 （4）气体环境：细胞培养所需气体主要有O2和CO2，它们的作用分别是O2是细胞代谢所必须的，CO2的主要作用是维持培养液的PH。 学生完成表格 【拓展】请列表比较动物细胞培养与植物组织培养的区别。 比较项目 原理 培养基 主要阶段 培养目的 植物组织培养 植物细胞的全能性 固体 脱分化与 再分化 主要是获得 新的植株 动物细胞培养 细胞的增殖