机械张力刺激成纤维细胞转分化成肌纤维母细胞在人类烧伤疤痕.docVIP

机械张力刺激成纤维细胞转分化成肌纤维母细胞在人类烧伤疤痕 作为烧伤创面瘢痕形成，导致收缩形成的肉芽组织，从而导致病人的审美和功能障碍。目前，主要的治疗方法侧重于伸展，以防止组织收缩。肉芽组织瘢痕形成过程中的收缩的myofi broblasts发挥了关键作用，但他们的存在，通常应减少后，伤口再上皮化。在增生性瘢痕成纤维细胞仍然存在，被认为造成进一步的肥大。以往的研究表明，机械紧张，导致肉芽组织中肌纤维母细胞数目增加。为了评估效果的机械张力拉伸的结果对一些肌纤维母细胞在烧伤创面的疤痕，在体外模型使用。该模型采用人体烧伤疤痕活检是拉伸和检查后1和6天的评估对一些肌纤维母细胞。拉伸造成的机械刺激后的成纤维细胞的数量增加。这表明，使用伸缩的机械刺激诱导成纤维细胞转分化，从而强调了进一步的调查，这一制度的最佳方法治疗烧伤瘢痕的重要性。在烧伤创面的愈合，肉芽组织收缩，是一种正常的现象，从而降低了原来的伤口[1 ]的大小。然而，以后再上皮化阶段继续收缩时，它会导致瘢痕挛缩，美容效果差，功能丧失，最终严重。因此，烧伤病人的康复主要集中在防止收缩愈合组织。用于预防这些并发症是最常见的政权激烈，物理治疗，伸展（定位，夹板和运动范围（ROM）的运动） ，烧伤面积，积极以及被动[ 2-5 ] 。然而，鲜为人知的是，在细胞水平上的疤痕组织对这些疗法的效果。此外，有知识的最佳水平和持续时间的力量应用于烧伤瘢痕。在疤痕收缩最重要的细胞类型之一，是肌纤维母细胞[6,7]。这是一个专门的细胞类型的皮肤成纤维细胞[8]转出现。肌纤维母细胞含有-平滑肌肌动蛋白（SMA）的收缩，如结构，因此，它们产生的机械力外基质，导致挛缩的组织[9,10] 。伤口后已重新上皮化，这些细胞通常会消失。在病理情况下，如增生性瘢痕形成，肌纤维母细胞表达SMA的持久性长后，形成一个新的表皮[11] 。正常，将形成增生性疤痕的伤口和伤口之间的这些差异背后的机制，主要是未知。然而，一个假设是，再上皮化后的瘢痕组织中的成纤维细胞数量的减少，将防止形成增生性疤痕，反之亦然。因此，最佳的物理治疗愈合的创面宜减少肌纤维母细胞的数目，或至少不会增加这些细胞的存在。 机械力已经证明，以刺激皮肤成纤维细胞转化为肌纤维母细胞[ 12 ] 。然而，力量的大小或时间需要诱使这转不知道。我们在先前的研究表明伸展烧伤疤痕和细胞增殖的时间，以及胶原蛋白的合成[13]之间的剂量 - 反应关系。这个问题已经提出了激烈物理治疗烧伤瘢痕，是否可以增加肌纤维母细胞的数量，从而导致更激烈的瘢痕挛缩，从而抵消其自身的目的。本研究的目的是探讨在愈合的创面组织的机械拉伸，如果目前在瘢痕的成纤维细胞的数量上有任何影响。如果物理刺激成纤维细胞转变成肌纤维母细胞的影响程度，我们希望澄清，如果这些影响连接到刺激的水平。由于人类伤口愈合，愈合过程在实验室动物之间的显着性差异，我们用体外模型使用人类的烧伤疤痕。在场的成纤维细胞后，物理刺激1和6天分别进行了检查，免疫组织化学。从五个肥厚性烧伤瘢痕标本连续五个烧伤患者在常规整形手术。所有样品均取自增生性疤痕，年龄超过12个月，从烧伤患者深度或全层损伤。 样品立即放在培养基，直到所有样品在24小时内进行实验从五个样品八件，每6毫米×20毫米的大小。长度的短边的一块被选择以便它适合当缝的拉伸装置，弹簧力是均匀分布。长边的长度是有限的，让一块拉长了维护的拉伸力。伸展疤痕组织先前的设备描述[13] 。在简短的，设备组成的两个金属腿，在两者之间的弹簧一端，分离与恒力0.79氮（扫描电镜0.03 N）的20毫米的腿。每个瘢痕组织块面积为1.2平方厘米，在0.66 N/cm2的力量。在50毫米的力量进行测量，为0.72牛顿（扫描电镜0.03 N）的。弹簧力是衡量一个电子秤重复整个实验没有任何显著的变化。所有作品，伸展和放松，被放进液额外的营养素（10%胎牛血清）和抗生素（青霉素50单位/毫升和链霉素50克/毫升）。该作品被培养在378c，5%的二氧化碳，湿度95%。从每个病人获得的八件，有四个用尼龙缝线缝合设备在无菌的环境，然后不断在潜伏期拉长。两个连接到设备的缝合件被拉长为1天，其他两个为6天其余四件完全相同的条件下培养，但只缝合，而不被连接到设备。这些作品作为正常对照。免疫组化法 伤口标本固定后1和6天，分别在4％的中性福尔马林，脱水，石蜡包埋，并进入截面， 5mm厚切。乙醇系列中的部分是在二甲苯脱蜡和再水化。非特异性蛋白结合，阻止与缓冲溶液在2％正常山羊血清（ PBS ） ，以避免背景染色。随后的章节培育， bated用鼠标单克隆抗体对-平滑肌肌动蛋白在室内温度为60分钟（ Dako公司，丹麦） 。的部分，然后在PBS冲洗，并培养与生物素IgG的第二抗体（媒介，蒲安臣， CA ）为30分钟（3219米克/毫升