关于KT201200的检测报告.docVIP

关于KT2012010的检测报告 农业部兽医诊断中心 分子生物学检测室 内容摘要：2010年3月2日，河北固安发生生猪疫情，病理检测室赴现地采样后于次日送达本室编号为KT2012010的检测任务。检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（通用及变异）、口蹄疫、猪圆环病毒四个项目，其中除口蹄疫为阳性外，其余各项均为阴性。现将口蹄疫检测情况做以报告。 对样品处理后，运用兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室口蹄疫病毒分子检测试剂盒进行FMD反转录酶聚合试验，初步判定所检样品中检验编号为3、4、5、6的四份样品为口蹄疫阳性。用本室合成引物进一步分型检测判定为口蹄疫O型或A型。 序列测定及与GeneBank登录的序列比对后证实，O型及A型与O型口蹄疫HLJOC12/03 株同源性分别为95%和94%，并且O型及A型扩增序列同为为O型。 结论，此次检测任务KT2012010为口蹄疫O型阳性。 2010年3月2日，本室接到编号为KT2012010的检测任务，其中样品编号为：1#小猪肺脏、2#小猪血清、3#小猪心肌、4#小猪扁桃体、5#小猪皮肤、6#大猪皮肤。1#检测项目为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（通用及变异）、猪圆环病毒三项，其余5个样品检测口蹄疫病毒。因1#样品所检测三个项目结果均为阴性，不做赘述。本报告着重叙述口蹄疫病毒的检测。 口蹄疫反转录聚合酶试验所用引物 因知识产权问题，兰州兽医研究所口蹄疫病毒分子检测试剂盒说明书内未含有引物序列。口蹄疫分型引物序列为世纪元亨公司孙明博士提供。 分型引物序列表 基因型 引物序列 产物长度 通用 P33：5’-agc ttg tac cag ggt ttg gc-3’ P32：5’-cag atg cag gag gac atg tc-3’ O型 P38：5’-gct gcc tac ctc ctt caa-3’ （与P33搭配） A型 P87：5’- gtc att gac ctc atg cag acc cac-3’ P88：5’- gtt att gac ctc atg cag acc cac-3’ P89：5’- gtc att gac ctc atg cac acc cac-3’ P90：5’- gtc att gac ctc atg cag act cac-3’ P91：5’- gtc att gac ctc atg caa acc cac-3’ P92：5’- gtc att gac ctt atg cag act cac-3’ PA 5’-gtc att gac ct(c/t) atg ca(g/c/a) ac(t/c) cac-3’ P1：5’-gaa ggg ccc agg gtt gga ctc-3’ P110：5’-gt(g/a/t/c) att gac ct(g/a/t/c) atg ca(g/a/t/c) ac(g/a/t/c) cac-3’ C型 P40 gtt tct gca ctt gac aac aca 与P33搭配 596bp Asia 1 P74:5’-gac acc act cag gac cgc cg-3’ 任意一条 与P33搭配 292 bp P75:5’-gac acc acc cag gac cgc cg-3’ P76:5’-gac acc aca caa gac cgc cg-3’ P77:5’-gac acg act cag aac cgc cg-3’） Pasia-I:5’-gac ac(g/c) ac(t/a/c) ca(g/a) (g/a)ac cgc g-3’ SAT 1 P126：5’- agg att gcc agt gag acc cac at-3’ P151：5’- agg at(t/c) gc(a/c) ag(t/c) gag ac(a/g) cac at-3’ P152：5’- agg att gct agt gag ac(a/c) cac at-3’ P153：5’- agg att gca agc gag acc cac at-3’ SAT 2 P168：5’- ggc gtt gaa aaa caa ct(g/c) tg-3’ P169：5’- ggc gtc gcg aaa cag ctt tt-3’ P170：5’- gg(c/t) gt(c/t) ga(a/g) aaa ca(a/g) (c/t)tg tg -3’ SAT3 P130：5’- ttc gga aga ttg ttg tgt g-3’ P158：5’- ttc gg(t/g) aga (c/t)tg ttg tgt g-3’ P159：5’- ttc ggt agg ctg ttg tgt