第10章 酶动力学.pptVIP

第10章? 酶动力学 研究酶促反应的速度以及影响酶促反应速度的各种因素，包括底物浓度、酶浓度、pH、温度、激活剂与抑制剂等。 一、底物浓度对酶促反应速度的影响 （单底物酶促反应） 1903 Henri 中间复合物学说认为酶与底物先络合成一个中间产物，然后中间产物进一步分解成产物和游离的酶。 中间复合物学说证据：p152 （二） “稳态理论” Briggs和Haldane 1925 （四）? 米氏方程中各参数的意义 1、 Km的物理意义 当反应速度v=1/2 Vmax时， Km = [S]， Km的物理意义是：当反应速度达到最大反应速度一半时的底物的浓度。单位：mol·L-1或mmol·L-1。Km是酶的特征常数之一，一般只与酶的种类、底物种类及反应条件有关，与酶的浓度无关。因此，在特定条件下测定酶的Km值，可以作为鉴别酶的一种手段。 一些酶的Km值（见表10-1）。 有的酶可作用于几种底物，因而就有几个Km 值，其中Km最小的底物称该酶的最适底物或天然底物。因为：Km愈小（达到Vmax一半所需的底物浓度愈小）,表示V对△[S] 越灵敏。 3、 Km 与底物亲和力 Km是ES分解速度（K2+K3）与形成速度（K1）的比值。 Km值近似表示酶与底物之间的亲和程度：Km值愈大，表示亲和程度愈小。 4、 Km与米式方程的实际用途 （2）根据相对速度推测酶活性中心饱和度Y： 5、?? Kcat的意义：催化常数或转换数 Kcat是指当酶被底物充分饱和时，每秒钟每个酶分子转换底物的分子数（称为转换数或催化常数），表示酶的最大催化活力的量度。 （五）?Km和Vmax的求解方法 ?Lineweaver-Burk? 双倒数作图法（最常用） 二、pH对酶促反应速度的影响 （一）酶的最适pH 最适pH：使酶促反应速度达到最大时的pH称为该酶的最适pH 。 最适pH与底物种类、浓度及缓冲液成分有关。 （二） pH影响酶活力的原因 过酸或过碱会影响酶蛋白构象，使酶活性丧失。 影响酶和底物分子解离状态，尤其是酶活性中心的解离状态，最终影响ES形成。 影响酶分子中一些基团解离，这些基团的离子化状态影响酶的专一性及活性中心构象。 三、? 温度对酶促反应速度的影响 （一）最适温度及影响因素 最适温度： 温度对酶促反应速度的影响有两个方面： 1. 温度升高，加快反应速度。 2. 温度升高，酶变性失活。 最适温度不是酶的特征常数，它与底物种类、作用时间、pH、离子强度 等因素有关。 温血动物酶的最适温度35℃—40℃；植物酶最适温度40℃—50℃；微生物差别大，如细菌Taq DNA聚合酶70℃。 温度系数Q10：温度升高10℃，反应速度与原来的反应速度之比，大多数酶的Q10一般为1~2。 四、? 激活剂对酶促反应速度的影响 （一） 无机离子的激活作用 无机离子： 1.金属离子：K+ 、Na+、Mg2+ 、Zn2+、Fe 2+ 、Ca2+等； 2.无机阴离子：Cl－、Br － 、 PO43－等； （二） 小分子有机物的激活作用 1.某些激活剂（如Cys、GSH）能还原巯基酶中的某些二硫键使成-SH，-SH是巯基酶起催化作用所需的基团，提高了酶活性。 2.金属螯合剂，如EDTA(乙二胺四乙酸)，可络合一些重金属离子，解除它们对酶的抑制，从而使酶活升高。 ? 五、?抑制剂对酶促反应速度的影响 失活 (inactivation)：凡是酶活力的降低或丧失都称为酶的失活。 抑制 (inhibition)：使酶活力下降或丧失但并不引起酶蛋白变性，它主要改变酶活性中心的化学性质。 抑制剂（inhibitor）：引起酶的抑制作用的物质称为酶的抑制剂。 研究抑制剂对酶的作用有重大的意义： （1）药物作用机理和抑制剂型药物的设计与开发；抗癌药 （2）了解生物体的代谢途径，进行人为调控或代谢控制发酵； （3）通过抑制剂试验研究酶活性中心的构象及其化学功能基团，不仅可以设计药物，而且也是酶工程和化学修饰酶、酶工业的基础。 （一）抑制程度的两种表示方法 1、相对活力 2、抑制分数 （二）抑制作用的类型 1、不可逆的抑制作用: 2、 可逆的抑制作用: （1）竞争性抑制（Competitive inhibition） ?酶活性部位是不能同时结合底物与抑制剂的。抑制剂具有与底物相似的化学结构，竞争酶的活性中心，并与酶形成可逆的EI复合物，阻止底物与酶结合；可以通过增加底物浓度(即提高底物的竞争能力）而解除此种抑制。 例如，