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日本脑炎病毒糖蛋白模拟短肽的筛选和基因定位_医学论文 日本脑炎病毒糖蛋白模拟短肽的筛选和基因定位_医学论文 作者：任君萍　马文煜　杨乔欣　肖毅　丁天兵　黎志东 【关键词】 脑炎病毒 　　关键词: 脑炎病毒，日本抗体，单克隆噬菌体肽库表位 　　摘 要:目的 寻找JEV mAb2F2识别的抗原表位，为JEV小分子多肽疫苗合理设计提供依据. 方法 链亲和素包被塑料平皿，加入生物素标记2F2与噬菌体随机15肽库，再洗脱，扩大培养进行三轮淘筛，经夹心ELISA、竞争ELISA鉴定后，挑取10个阳性克隆，DNA测序，与JEV E蛋白同源分析. 结果 筛选到的噬菌体能特异地与2F2结合，并且这种结合可被天然抗原所抑制.10个克隆的氨基酸序列相同:-HTPQWSP-SQYRPSLR-，同源分析在JEV E蛋白224～229aa得到一个同源性较高的序列:PXXSPS. 结论 PXXSPS可能为JEV E蛋白的一个模拟表位. 　　Keywords:encephalitis virus，Japaneseantibodies，mono-clonalbacterio phagespeptide libraryepitopes 　　Abstract:AIM To screen the epitope of Japanese encephali-tis virus（JEV）mAb2F2in order to assist in the design of the peptide vaccine against JEV.METHODS The plasmid dish with SV was coated，the biotinylated2F2and15-mer peptide library were added，and the binding phage was eluted and then amplified.After three rounds biopanning，the posi-tive clones were identificated by sandwich ELISA，competi-tion ELISA and DNA sequencing.Amino acid sequences of10positive clones were compared with the JEV E protein.RESULTS Short peptide displayed on phage specifically was bound to2F2and the binding was inhibited by natural JEV Ag.Amino acid sequences of10positive clones were consen-sus:-HTPQWSPSQYRPSLR-.By homology analysis，one higher homologous sequences were found in JEV E protein224～229aa:PXXSPS.CONCLUSION PXXSPS might be a minotope of JEV E protein. 　　0 引言 　　日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）引起的流行性乙型脑炎（乙脑），是一种严重的急性中枢神经系统传染病，主要在东南亚等地区流行.采用疫苗进行预防接种是控制该病流行的有效措施.目前国内外使用的乙脑疫苗尚不理想，如出现不良反应和有毒力逆转的可能性，乙脑新型疫苗研制势在必行.但对JEV抗原表位认识的不足影响了乙脑新型疫苗的研制.噬菌体表面呈现技术（phage display）和随机肽库技术（random peptide library，RPL）提供了深入研究病毒抗原表位的可能［1］ .JEV囊膜糖蛋白E是病毒表面主要的结构蛋白与诱导保护性免疫的主要成分［2］ .本实验用高中和活性抗JEV E蛋白的鼠mAb2F2淘筛噬菌体随机15肽库，以期找出这株mAb识别的抗原表位，为JEV小分子多肽疫苗合理设计提供依据. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 X15（15肽库） 由Australia的Yip YL教授惠赠，随机多样性1.3×109 ，测序引物5’-CTGAA-GAGAGTCAAAAGC-3’，宿主菌K91kana. 　　1.1.2 链霉亲和素（SV）和生物素酯（NHS-biotin） 购自Sigma公司. 　　1.1.3 HRP-anti M13mAb 为Pharmacia产品. 　　1.1.4 噬菌体单链DNA提取试剂盒 为上海华舜公司产品.