早期康复训练对缺氧缺血大鼠脑结构和认知功能的影响_医学论文.docVIP

早期康复训练对缺氧缺血大鼠脑结构和认知功能的影响_医学论文 早期康复训练对缺氧缺血大鼠脑结构和认知功能的影响_医学论文 【摘要】 目的： 探讨早期康复训练对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织结构和认知功能的影响. 方法: 24只SD大鼠随机分为正常对照组、HIBD组、HIBD康复干预组. HIBD组和HIBD康复干预组按Rice法建立HIBD模型，HIBD康复干预组于建模后72 h开始进行为期30 d的早期康复训练. 通过Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力，观察脑重量变化，HE染色检测海马及皮层神经元病变. 结果: (1) HIBD组大鼠学习与记忆保持能力均低于HIBD康复干预组和正常对照组，HIBD康复干预组测试成绩与正常对照组相比无统计学差异.（2）HIBD组和HIBD康复干预组建模侧脑重均低于正常对照组［(0.638±0.019) g］，HIBD康复干预组的建模侧脑重［(0.428±0.085) g］，高于HIBD组［(0.348±0.043) g］. 三组大鼠未建模侧脑重无明显差异.(3) HIBD组和HIBD康复干预组大鼠脑皮层和海马存活神经元较正常对照组少. 但与HIBD组相比，HIBD康复干预组存活神经元数量增多. 结论： 早期康复训练对围产期HIBD后脑认知功能恢复具有一定的作用，可促进损伤后脑神经细胞的存活，促使脑损伤修复. 【关键词】 缺氧 脑 脑缺血 脑损伤 康复 Morris水迷宫 大鼠 　　0引言 　　围生期缺氧缺血性脑损伤(hypoxiaischemic brain damage，HIBD)是儿童脑瘫和癫痫的重要原因之一［1］. 近年来有关早期康复训练对其影响的研究已成为热点. 临床研究提示,早期康复训练可促进HIBD患儿损伤脑组织功能的恢复；然而是否能同时促进损伤后脑组织结构的恢复，无法得到直接的病理学证据. 为此，我们对HIBD新生大鼠进行早期康复训练，同时观察其脑组织结构和认知功能的改变. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　7日龄SD大鼠24只(重庆医科大学动物实验中心提供). 电热恒温水浴箱（上海跃进医疗器械厂），Morris水迷宫，石蜡包埋机，石蜡切片机，显微镜（日本Olympus公司）. 　　1.2方法 　　1.2.1动物分组及模型的制备24只SD大鼠随机分为正常对照组、HIBD组、HIBD康复干预组. 参照Rice法［2］建立HIBD动物模型，具体为大鼠经乙醚麻醉后于预部正中切口，分离左颈总动脉，用4-0丝线行双线结扎，缝合皮肤. 手术结束后动物回窝恢复4 h，然后将其放入置于37℃水浴的密闭缺氧箱中(容积10 L)，持续充以80 mL/L氧氮混合气体，气流量0.5 L/min，维持2.5 h. 缺氧完毕后，继续让动物在缺氧箱内休息15 min再放回窝中. 正常对照组只游离而不结扎左颈总动脉，亦不予缺氧处理. 各组大鼠均由母鼠代养. 　　1.2.2康复训练方法对HIBD康复训练干预组，按以下方法进行康复训练： 　　早期搬动触摸：自建模后72 h开始，每日将幼鼠与母鼠分离，用毛刷从头部到尾部沿脊柱轻刷幼鼠，每分钟40次，持续15 min，结束后将母鼠和幼鼠同时移回笼内，连续10 d. 丰富环境刺激：参照Diamond等［3-4］方法设计丰富环境. 根据大鼠习性，在60 cm×40 cm×40 cm笼子内置入不同颜色及形状的物体、房屋、管道、斜坡、秋千、各种塑料“玩具”、带有芳香气味的棉球等，且每周通过增加或变换笼内的物体而改变环境2次，以造成新的刺激. 早期触摸结束后（生后21 d或损伤后14 d)，动物断奶，每日将干预组大鼠暴露于丰富环境刺激中2 h，持续20 d. 其间注意避免其它的噪音刺激. 非干预组及正常对照组大鼠于生后21 d断奶后饲养于28 cm×18 cm×15 cm标准饲养笼内，持续20d. 　　1.2.3学习记忆能力测定所有大鼠于41日龄，以Morris水迷宫测试空间记忆能力.(1)定位航行试验：测量获取学习记忆的能力. 第1天让大鼠自由游泳2 min，从第2天起，每天上午训练4次，每次从不同点入水，记录大鼠寻找并爬上平台所需时间(即潜伏期)，连续5天. 如果大鼠在120 s内未找到平台，潜伏期为120 s.(2)空间探索试验：测量保持空间位置记忆的能力. 上述6天实验结束后，于次日上午撤除平台，选择第3象限池壁中点作为入水点，将大鼠面向池壁放入水中，记录在120 s内跨过该象限平台相应位置的次数. 　　1.2.4脑重测定水迷宫测试结束后，将大鼠断头取脑，用镊子夹去双侧嗅球，脑干沿小脑下缘修平，保留绒球小结叶，沿中线对剖，用纱布擦干表面血迹，用电子天平分别秤取左右半球脑重量. 　　1.2.5病理改变秤取脑重并肉眼观察脑形态变化后，立即将左半球固定