汉坦病毒S基因0.7kb片段真核载体的构建、表达及基因免疫_医学论文.docVIP

汉坦病毒S基因0.7kb片段真核载体的构建、表达及基因免疫_医学论文 汉坦病毒S基因0.7kb片段真核载体的构建、表达及基因免疫_医学论文 x 作者：张芳琳　徐志凯　阎岩　白文涛　吴兴安　罗雯　赵茜 【关键词】 汉坦病毒 　　关键词: 汉坦病毒S基因疫苗，DNA基因表达抗体生成 　　摘 要:目的 在本室前期工作的基础上，进一步进行汉坦病毒S基因0.7kb片段的真核表达及基因免疫的研究. 方法 构建汉坦病毒76-118株S基因5’端700bp片段的真核表达载体pcDNA3.1-S0.7，脂质体法转染COS-7细胞，免疫荧光检测表达结果用该质粒免疫BALB/c小鼠，并用免疫荧光法及ELISA法检测基因免疫的体液免疫应答效果. 结果 免疫荧光检测结果表明，目的基因在COS-7细胞中获得瞬时表达用pcDNA3.1-S0.7基因免疫小鼠可引起抗汉坦病毒核蛋白（NP）特异性的抗体应答. 结论 汉坦病毒S基因0.7kb片段可刺激机体产生特异的抗汉坦病毒体液免疫应答，为进一步进行细胞免疫反应的检测及基因疫苗的研究提供实验基础. 　　Keywords:Hantaan virusS segmentvaccines，DNAgene expressionantibody formation 　　Abstract:AIM To investigate the expression and immuno-genicity of recombinant eukaryotic plasmid containing compe-tent fragment of Hantaan virus S segment.METHODS Re-combinant eukaryotic expression vector pcDNA3.1-S0.7was constructed by cloning S segment0.7kb fragment into pcDNA3.1（+）and transfected COS-7cells by lipofectin.Immunoflourescence was used to identify the expression.Af-ter BALB/c mice were vaccinated by pcDNA3.1-S0.7，im-munoflourescence and ELISA were used to detect the anti-body titers of immunized mice sera.RESULTS Eukaryotic expression vector pcDNA3.1-S0.7was proved to be success-fully constructed by restriction enzyme analysis.Immuno-flourescence and ELISA results showed that the truncated NP was transient expressed in COS-7cells and pcDNA3.1-S0.7induced specific antibody against NP in immunized mice.CONCLUSION It is suggested that the0.7kb competent fragment of hantaan virus S segment could directly stimulate specific anti-Hantaan virus humor immunity in BALB/c mice. 　　0 引言 　　肾综合征出血热（HFRS）是由汉坦病毒引起的一种严重危害人类健康的烈性传染病.汉坦病毒76-118株是其国际标准株.近年来本室对汉坦病毒核蛋白（NP）做了大量研究工作，结果表明NP上存在多个抗原位点，且其中可能有中和抗原位点.对NP分段表达结果表明，汉坦病毒NP的抗原位点主要集中在其氨基端aa1-274区段上，即S基因0.7kb片段的编码蛋白，原核表达该蛋白免疫小鼠的结果表明，0.7kb片段表达蛋白可能具有免疫保护作用 ［2-5］ .我们构建了汉坦病毒S基因5’端700bp片段的真核表达载体，并进一步研究了该载体在哺乳动物细胞中的表达和刺激小鼠产生体液免疫应答的能力. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 1.1.1 细胞、工程菌与质粒 COS-7细胞系由本校免疫学教研室欧阳为明博士惠赠.E.coli JM109宿主菌由本室保存.pGEX-4T1-S0.7重组质粒为本室构建［4］ .真核表达载体pcDNA3.1（+）购自Invitro-gen公