汉滩病毒S基因5端311bp编码蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析_医学论文.docVIP

汉滩病毒S基因5端311bp编码蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析_医学论文 汉滩病毒S基因5端311bp编码蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析_医学论文 作者：刘勇　徐志凯　闫岩　张芳琳　王海涛　薛小平　吴兴安 【关键词】 汉滩病毒 关键词: 汉滩病毒核蛋白原核表达纯化抗原位点 摘 要:目的 进一步了解汉滩病毒核蛋白氨基端的抗原特性. 方法 构建汉滩病毒S基因5’端311bp片段的原核表达载体，并诱导表达和纯化了Mr 3.6×104 的融合蛋白（汉滩病毒核蛋白氨基端Mr 1.0×104 与Mr 2.6×104 GST融合）用mAb，以Western-blot和ELISA方法对该蛋白的抗原位点进行了鉴定. 结果 与完整核蛋白反应的mAb中仅有部分与Mr 3.6×104 融合蛋白反应，而与核蛋白氨基端Mr 2.6×104 片段反应的5株mAb（1A8，A35，8E8，3A9，3G11）都能与Mr 3.6×104 融合蛋白反应. 结论 汉滩病毒核蛋白氨基端Mr 1.0×104 以内存在一个或几个线性表位，而羧基端可能主要起着维持完整核蛋白立体构象的作用，并影响识别立体表位的mAb与该蛋白的结合. 　　Keywords:hataan virusnucleoproteinprokayotic expres-sionpurificationantigentic epitope 　　Abstract:AIM To further understand the antigen charac-teristic of the amino proximal of hantaan virus nucleoprotein.METHODS We constructed the prokaryotic vector of han-taan S gene5’-terminal311bp，then inducingly expressed and purified the Mr 3.6×104 fusion protein.Then，we further identified its antigentic epitopes by Western blot and ELISA methods using the nucleoprotein specific mAbs.RESULTS We detected that only parts of mAbs reacting with integrated nucleoprotein could react with Mr 3.6×104 fusion protein，and all of those5mAbs（1A8，3A9，A35，3G11，8E8）reac-ting with nucleoprotein amino proximal Mr 2.6×104 region could react with this fusion protein.CONCLUSION There exist one or more linear epitopes in the amino proximal Mr 1.0×104 region of hantaan virus nucleoprotein，and the carboxy-proximal region perhaps plays a significant role in maintaining the three-dimensional constructions of nucleoprotein and in-fluencing the combination of integrated nucleoprotein with mAbs which recognize the three-dimensional epitopes. 　　0 引言 　　肾综合征出血热（HFRS）是一种由汉坦病毒引起的烈性传染病，严重威胁着人类健康.汉坦病毒目前可分为不同的型别，在我国流行的主要是I型（汉滩病毒）和II型（汉城病毒）.目前对汉滩病毒S基因及其编码的核蛋白（NP）的序列已经清楚，但其在病毒感染及刺激机体免疫应答中的作用尚未完全阐明.本室前期研究已证明汉滩病毒NP氨基端结构（aa1-274，Mr 2.6×104 ）对维持该NP的免疫原性及其与单克隆抗体（mAb）的反应性具有重要作用［1-3］ .在上述工作基础上，我们进一步对汉滩病毒76～118株NP氨基端约100位氨基酸的肽段进行了表达和纯化，并用不同特性的mAb对其进行了抗原位点分析，以期更清楚地了解汉滩病毒NP的免疫学特性，为HFRS基因工程疫苗的研制提供实验依据. 　　1 材料和