液相色谱串联质谱法测定兔血浆中葛根素的浓度_药学论文.docVIP

液相色谱串联质谱法测定兔血浆中葛根素的浓度_药学论文 液相色谱串联质谱法测定兔血浆中葛根素的浓度_药学论文 【摘要】 目的 建立测定兔血浆中葛根素浓度的液相色谱串联质谱法。方法 血浆加入内标橙皮苷后经固相萃取处理，采用Aglient C18柱（150 mm×2.1 mm，3.5 μm）分离，流动相为甲醇10 mmol·L-1醋酸铵缓冲液乙腈（体积比70∶20∶10），流速为0.2 mL·min-1。样品在串联质谱中经ESI源离子化后以多反应离子监测方式测定。结果 葛根素在10~3 000 ng·mL-1线性良好(r=0.9986)，检测限为10 ng·mL-1，回收率为99.91%~103.92%，绝对回收率为91.33%~100.40%，日内、日间变异（RSD）均≤15%，色谱峰保留时间为1.67 min。结论 方法灵敏、准确、快速、特异性强，适用于中药葛根素的药动学研究。 【关键词】 液相色谱质谱法；葛根素；血药浓度 　　Abstract:Objective To establish an HPLCMSMS method for determining the content of plasma puerarin. Methods The plasma sample pretreated with solidphase extraction after addition of internal standard of hesperidin was analyzed on an Aglient C18 column（150 mm×2.1 mm，3.5 μm）. The mobile phase consisted of methanol10 mmol·L-1 NH4AC bufferacetonitrile（70∶20∶10） with the flow rate of 0.2 mL·min-1. The sample was ionized by electrospray ionization source in the triple quadruple tandem mass spectrometer，then, it was quantitated with multiple reaction monitoring mode. Results There was a good linearity over the concentration ranges of 10~3000 ng·mL-1 (r=0.9986). The detection limit of this method was 10 ng·mL-1. The recovery and absolute recovery were 99.91%~103.92% and 91.33%~100.40%，respectively. The withinday and betweenday deviations were less than 15% and the chromatography peak tR was 1.67 min. Conclusion The method is sensitive，accurate，rapid and suitable for the determination of puerarin in human plasma. 　　Key words:liquid chromatography-tandem mass spectrometry；puerarin；plasma concentration 　　葛根素（puerarin）是中药葛根的主要成分之一，具有扩张冠脉血管、降低血压和心肌耗氧量、抗心律失常等作用［1］。文献报道的葛根素血药浓度测定方法多数是高效液相色谱法［2-4］，但有时也难以满足药动学研究中微量血药浓度的测定要求，且分析用时较长。本文建立测定葛根素血药浓度的液相色谱串联质谱（LCMSMS）法，具有简便、灵敏度高、特异性强且检测快速等优点，适用于葛根素的药动学研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试药 美国AB公司API3000型液质联用系统；Waters 20管型固相萃取仪；TECHNE样品浓缩仪；Waters HLB固相萃取小柱(100 mg)。葛根素注射剂（浙江康恩贝制药股份有限公司，0.25 g/5mL）；葛根素、橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为：0752200108，0721200104）；甲醇、乙腈为色谱纯；醋酸胺为分析纯；重蒸馏水。 　　1.2 色谱及质谱条件色谱柱：Aglient C18（150 mm×2.1 mm，3.5 μm），流动