第二章清洗、消毒级培养基的配制.pptVIP

教学目的和要求：2学时 重点和难点： 了解实验室器皿消毒的方法； 了解培养基的成分及作用 第一节 清洗与消毒 2.1 清洗 2.2 消毒 清洗的目的：为清除杂质和微生物，使器皿内不残留任何影响细胞生长的成分，其要求比普通实验用器皿的清洗要高。 因器皿的材料、结构、使用方法不同，清洗方法也有区别。 2.1.1 玻璃器皿的清洗 浸泡 刷洗 浸酸 冲洗 要求：干净、透明、无油迹、无残留物 1、浸泡 清水 新的、用过的都要浸泡于水 5％盐酸 2、刷洗 清洗剂 内外 要求：选择软毛刷 不要留死角 3、浸酸 要求：强氧化作用；对玻璃器皿无腐蚀作用; 常用次强酸；不少于6小时。 配制时注意：戴耐酸手套。 配制方法：先将重铬酸钾溶于水，然后缓慢加入浓硫酸。 4、冲洗 用蒸馏水冲洗3－5遍。 2.1.2 胶塞的清洗 浸泡于水； 2％NaOH（或洗衣粉）煮沸10－20分钟； 自来水冲洗； 1％稀盐酸浸泡30min，或蒸馏水冲洗后再煮沸10－20min，晾干备用。 2.1.3 塑料制品的清洗 脱脂棉轻拭； 用水冲洗干净； 2％NaOH浸泡过夜； 自来水冲洗； 5％盐酸溶液浸泡30min； 自来水冲洗； 蒸馏水洗。 2.1.4 滤器的清洗 新滤器清洗方法： 清洁液中浸泡24h 然后用流水冲洗 蒸馏水冲洗 烤干 使用滤器的清洗方法： 过夜水中浸泡 流水冲洗至滤面疏通 50度烤干 清洁液中浸泡24小时 蒸馏水冲洗 烤干 包装 消毒 2.1.5 包装 组织培养的器皿要清洗、晾干； 消毒前必须进行严密包装，以便消毒及储存，同时防止落入灰尘及消毒后被再次污染。 2.2 消毒 控制污染是细胞培养的关键环节； 污染主要原因：A.操作不当； B.器皿和培养液消毒不合 格 2.2.1 物理灭菌法 1. 紫外线消毒 应用范围：超净台 少数培养器皿 消毒对象：大部分细菌，真菌抵抗力 强；革兰氏阴性菌最为敏感。 消毒原理：破坏微生物的核酸和蛋白质等而 使其灭活（直接作用）。 紫外线产生的臭氧杀死微生物 （间接作用）。 消毒范围：距地面不超过2.5米，消毒物品不 能互相遮挡。超净台消毒灯距台 面距离不应超过1.5米 消毒时间：30min左右； 注意事项：紫外线对人皮肤、眼睛都有伤害；紫外线可产生臭氧，污染空气。 2.湿热消毒 高压蒸汽消毒，最广泛，效果最好的消毒方法。 高压灭菌锅：培养基、工具等的灭菌 根据大小分为：小型、中型、大型 有全自动、手动之分。 玻璃器皿消毒条件：121.3℃（101.3kPa），20 min； 培养液及橡胶制品：115℃（65kPa），10 min 3. 干热消毒 主要用来消毒玻璃器皿。 用电热烤箱将物品加热到160℃以上，并保持90～120min，以杀死细菌。 注意：不可骤冷。 灼烧也是干热消毒灭菌方法之一，快捷方便，通常金属器具和玻璃口缘。 5.过滤除菌 用滤器和微孔滤膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的目的。 2.2.2 化学消毒法 利用化学试剂消毒那些不能用来进行物理消毒的物品和器具。 常用消毒剂有：75％酒精、2％戊二醛 2.3 培养基及其配制 一、培养基的成分及作用 在离体条件下，植物组织良好的营养要求，随植物种类而变化。 培养基种类有很多（实验指导书的后面附表），但一般可包括如下几部分： 生长素类 思考题 细胞培养室常见的消毒方法有哪些? 培养基的组成成分有哪几类，在离体培养中的功能是什么？ 2、有机营养成分 糖（蔗糖）： 糖在培养基中的作用： 1）.为细胞提供合成新物质的炭骨架。 2）.为细胞的呼吸代谢提供底物与能源。 3）.维持培养基的渗透压。 维生素：为使培养物生长的更好，可以根据培养目的添加一种或多种维生素：硫胺素（VB1）、烟酸(Vpp)、泛酸钙(VB5)、吡哆醇(VB6)、钴胺素(VB12)、叶酸(VBc)、抗坏血酸(VC)等。 氨基酸：是蛋白质的组成成分。常用的是甘氨酸及多种氨基酸的混合物，如水解酪蛋白、水解乳蛋白等。 肌醇：又称环己六醇，在糖类的互相转化中起作用。根据培养植物不同，是否添加。 腺嘌呤：是合成各种细胞分裂素的前体之一，外源添加腺嘌呤有利于细胞自身合成细胞