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《医学免疫学》课程实验教案 实 验 一 实验名称：E-玫瑰花环形成实验 计划学时：4 学时 实验目的与要求：1.掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法。 2.熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。 实验仪器、试剂：淋巴细胞分层液（Ficou）、1%绵羊红细胞、肝素抗凝人血、无钙镁Hanks液、水平离心机、0.8%戊二醛、37℃水浴箱、显微镜、其他。 实验对象：实验同学 实验原理：体外测定人外周血中T淋巴细胞数量的方法有多种,以玫瑰花环试验最为简易常用，T淋巴细胞数量的变化与机体的细胞免疫功能状态有一定关系。人周围血液中T淋巴细胞表面有绵羊红细胞受体，与绵羊红细胞相遇时，在其周围形成花环样细胞团，凡能结合三个以上绵羊红细胞者称为E攻瑰花环形成细胞。正常人的花环形成率为50~70%，大致可以代表周围血中T细胞的百分数。临床上多用于某些疾病的诊断及疗效的观察。 操作方法： 1、取肝素抗凝血1~2ml，用分层液分出淋巴细胞并洗涤，用Hanks液调整细胞浓度为2—2.5×106ml。 2、取小试管加入l ml淋巴细胞悬液及1%羊红细胞0.l ml，混匀置37℃水浴箱5分钟。 3、800～1000 r/min低速离心5分钟，放4℃冰箱2小时。 4、轻轻旋转试管使团块混匀，加2滴0.8%戊二醛液，摇匀，室温静置10分钟，使E花环固定。 5、取悬液一滴放于载玻片上，将稀释的瑞氏染液加入玻片上染色3分钟。 6、弃去染液，待干后油镜观察，计数200个淋巴细胞中形成花环的细胞效，算出百分率。 实验现象与数据：1、淋巴细胞染成深蓝色，羊红细胞染成淡红色。 2、每个淋巴细胞上粘附三个以上羊红细胞者即为玫瑰花环形成细胞。 结果分析与结论：共计200个T淋巴细胞，算出形成花环细胞占全细胞数的百分率。正常人的花环形成率为50~70%，大致可以代表周围血中T细胞的百分数。临床上多用于某些疾病的诊断及疗效的观察。 注意事项：1.离心时注意使用800～1000r/min低速离心。 2.要轻轻旋转试管使团块混匀，以防形成的花环散开。 思考与创新： 实 验二 实验名称：淋巴细胞转化实验 计划学时： 实验目的与要求：1.掌握淋巴细胞转化现象的试验方法和原理。 2.熟悉淋巴母细胞形态学观察方法。 实验仪器、试剂：1、正常人淋巴细胞（用分层液分出）。 2、培养液：0.5%水解乳蛋白Hanks氏液（含20%小牛血清和青霉素100单位/ml、链霉素100微克/ml）。用5.6%NaHCO3调整PH至7.2~7.4。 3、植物血凝素(PHA)，姬姆萨染液。 4、青霉素小瓶、吸管、载玻片、显微镜、离心机、恒温箱等。 实验对象： 实验同学 实验原理： T淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性抗原（PHA、PWM和ConA）刺激均能使细胞发生转化。T淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平，常被作为细胞免疫功能指标之一。淋巴细胞转化试验可从周围血中分离出淋巴细胞，也可采用全血试验。 操作方法： 1、制备细胞悬液：用培养液将淋巴细胞稀释成2×l06/ml，细胞悬液。 2、分装：向两个小瓶中各加2ml，细胞悬液,一瓶加PHA 0.1ml(100单位)，另瓶不加作对照。 3、37℃培养72小时。离心沉淀，用Hanks液洗两次。 4、用沉淀推成血片,加姬姆萨染液栗色,镜下观察计数200个以上淋巴细胞，算出转化率。 实验现象与数据： 1、成热的淋巴细胞:与外周血中小淋巴细胞形态一致、直径6~8微米，核染色质网密、无核仁、胞浆略大于核贡轻度嗜碱性。 2、过度型淋巴细胞:直径10一20微米核质密，但有明显核仁。 3、淋巴母细胞，细胞增大，形态不规则，直径20~30微米，核也增大，染色质网纤细有核仁1~2个，胞浆扩大，强嗜碱性可见数个空泡及颗粒。 4、网状细胞样母细胞：细胞增，形态不规则，核淡染有1一2个大小不规则的核仁，胞浆扩大、含空泡，嗜碱性不强有透明感。 用姬姆萨染色后，计算200个淋巴细胞中转化为母细胞的细胞数（包括过渡型、母细胞和分裂相淋巴细胞），依转比的百分率判定T淋巴细胞的功能。 结果分析与结论：对照管转化率1%左右，加PHA之管转化主约为70%左右。T淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平，常被作为细胞免疫功能指标之一。 注意事项： 思考与创新： 实 验 三 实验名称：中性粒细胞吞噬功能测定 计划学时：4学时 实验目的与要求：1、掌握中性粒细胞吞噬白色葡萄球菌实验的操作过程 2、掌握瑞氏染色的基本步骤及吞噬百分率的计算 实验仪器、试剂：葡萄球菌培养液 抗凝剂 载玻片 瑞氏染液 水浴箱 离心机