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温州大学化材学院 微纳结构材料 物理化学研究所 荧光及荧光分析 陈 伟 wchen@wzu.edu.cn 荧光及荧光分析 概述 基本原理 荧光分析 仪器与技术 应用与示例 光学光谱区 什么是荧光 ？ 荧光的发现及发展 在单重激发态中，两个电子平行自旋，单重态分子具有抗磁性，其激发态的平均寿命大约为10-8s，而三重态分子具有顺磁性，其激发态的平均寿命为10-4 ~ 1s以上（通常用S和T分别表示单重态和三重态）。 电子跃迁 处于激发态的电子，通常以辐射跃迁方式或无 辐射跃迁方式再回到基态。 辐射跃迁主要涉及到荧光、延迟荧光或磷光的发 射； 无辐射跃迁则是指以热的形式辐射其多余的能 量，包括振动弛豫（VR）、内转移（IR）、外 转移（EC）及系间窜越（ISC）等，各种跃迁方 式发生的可能性及程度，与荧光物质本身的结构 及激发时的物理和化学环境等因素有关。 辐射跃迁 无辐射跃迁 振动弛豫 它是指 在同一电子能级中，电子由高振动能级转至低振动能级，而将多余的能量以热的形式发出。发生振动弛豫的时间为10-12s数量级。 无辐射跃迁 内转换 当两个电子能级非常靠近以至其振动能级有重叠时，常发生电子由高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级。 无辐射跃迁 外转移 指激发分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用及能量转移，使荧光或磷光强度减弱甚至消失。这一现象称为“熄灭”或“猝灭”。 荧光与磷光的根本区别： 荧光是由激发单重态最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的；而磷光是由激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的。 无辐射跃迁 系间窜越 指不同多重态间的无辐射跃迁， 例如S1→T1就是一种体系间跨跃。 通常，发生体系间跨跃时，电子 由S1的较低振动能级转移至T1的 较高振动能级处。有时，通过热 激发，有可能发生T1→S1，然后 由S1发生荧光。这是产生延迟荧光的机理。 改变电子自旋，禁阻跃迁，通过自旋—轨道耦合进行。 激发光谱与发射光谱 任何荧（磷）光都具有两种特征光谱：激发光谱与发射光谱。它们是荧（磷）光定性分析的基础。 1）激发光谱 改变激发波长，测量在最强荧（磷）光发射波长处的强度变化，以激发波长对荧光强度作图可得到激发光谱。 激发光谱与发射光谱 激发光谱形状与吸收光谱形状完全相似，经校正后二者完全相同！这是因为分子吸收光能的过程就是分子的激发过程。 激发光谱可用于鉴别荧光物质；在定量时，用于选择最适宜的激发波长。 激发光谱与发射光谱 2）发射光谱 发射光谱即荧光光谱。一定波长和强度的激发波长辐照荧光物质，产生不同波长的强度的荧光，以荧光强度对其波长作图可得荧光发射光谱。 由于不同物质具不同的特征发射峰，因而使用荧光发射光谱可用于鉴别荧光物质。 激发光谱与发射光谱 i）波长比较 与激发（或吸收）波长相比，荧光发射波长更长。 ii）形状比较 荧光光谱形状与激发波长无关。换句话说，不管激发波长如何，电子都是从第一电子激发态的最低振动能层跃迁到基态的各个振动能层。 激发光谱与发射光谱的关系 iii）镜像对称 通常荧光光谱与吸收光谱呈镜像对称关系 分子结构与荧光的关系 产生并可观察到荧光的条件： i）分子具有与辐射频率相应的荧光结构（内因）； ii）吸收特征频率的光后，应可产生具一定量子效率的荧光。 即量子效率 ?F足够大： 分子结构与荧光 1）跃迁类型： 通常，具有?—?*及n—?*跃迁结构的分子才会产生荧光。而且具?—?*跃迁的荧光效率比 n—?*跃迁的要大得多。 2）共轭效应： 共轭度越大，荧光越强。 分子结构与荧光 3）刚性结构和共平面性： 分子刚性（Rigidity）越强，分子振动少， 与其它分子碰撞失活的机率下降，荧光量 子效率提高。 如荧光素（ ?大）与酚酞（?=0）； 分子结构与荧光 分子结构与荧光 4）取代基： ? 给电子取代基增强荧光（p-?共轭），如 -OH、-OR、 -NH2、-NR2等； ? 吸电子基降低荧光，如 -COOH、 -C=O、 -NO2、-NO、-X等； ? 重原子降低荧光但增强磷光， 如苯环被卤素取代，从氟苯到碘苯，荧光逐渐减弱到消失，该现象也称重原子效应。 取代基的影响 吸电子取代基 取代基的位置 重原子效应 重原子效应 最低单重态的性质 含氮杂环有机物 含羰基有机物 影响荧光的外界因素 （一）溶剂效应：